Cdx2對胃癌生物學行為的影響及作用機制的研究.pdf

1、廣西醫(yī)科大學博士學位論文Cdx2對胃癌生物學行為的影響及作用機制的研究姓名：李雷申請學位級別：博士專業(yè)：外科學指導教師：肖強20090601和理論依據(jù)，指導進一步的臨床應用；最終通過基因芯片掃描技術研究C d x 2 過表達引起的基因表達譜改變情況，探討其在胃癌細胞中產生作用的分子機制。實驗內容包括以下四部分：第一部分C d x 2 真核表達載體的構建及其對胃癌細胞M G C ．8 0 3 生物學行為的影響目的：通過構建人同源基因C d

2、 x 2 真核表達載體，轉染胃癌細胞M G C ．8 0 3 ，觀察過表達C d x 2 基因對胃癌細胞生物學性狀的影響。方法：從人胃癌組織中擴增出C d x 2 基因的O R F 全長，構建p C M V - C d x 2 ．H A 真核表達載體；脂質體介導法瞬時轉染p C M V - H A 和p C M V - C d x 2 ．H A 至人胃癌細胞M G C ．8 0 3 ，兩組細胞命名為M G C ．8 0 3 ／E V ，

3、M G C ．8 0 3 ／C d x 2 。應用R T - P C R 檢測各組C d x 2 基因的m R N A 表達情況，W e s t e r n b l o t 檢測各組C d x 2 蛋白的表達情況。M T r法觀測細胞增殖，透射電鏡觀察轉染細胞形態(tài)學的改變，流式細胞儀分析各組細胞周期和凋亡。結果：成功構建p C M V - C d x 2 ．H A 真核表達載體，在瞬時轉染4 8 h的M G C ．8 0 3 ／C d

4、x 2 組細胞中檢測到較高水平C d x 2 基因的m R N A 和蛋白表達。與未轉染組、M G C ．8 0 3 ／E V 組比較：M G C - 8 0 3 ／C d x 2 組的胃癌細胞在轉染7 2 h 時生長受到明顯抑制，細胞周期G o ／G ，期比例上升，S 期比例下降，胃癌細胞的凋亡率也明顯升高( P < O ．0 5 ) 。透射電鏡顯示M G C ．8 0 3 ／C d x 2 組的胃癌細胞出現(xiàn)明顯的凋亡表現(xiàn)。結論