TRPV1受體激活對(duì)內(nèi)毒素血癥小鼠急性肺損傷的影響及機(jī)制.pdf

1、目的:
　　 研究激活內(nèi)毒素血癥小鼠TRPV1受體激活和抑制后炎癥指標(biāo)（TNF-α、IL-6、IL-10和其上游調(diào)控因子NF-κB和TLR4以及SP和CGRP）和氧化應(yīng)激指標(biāo)(MDA、SOD和CAT以及上游調(diào)控指標(biāo)HO-1和Nrf2)的變化。
　　 方法:
　　 1.取SPF級(jí)ICR小鼠108只，雄性，體重18-22克。將小鼠隨機(jī)分為6組:正常對(duì)照組(n=18)，CAP對(duì)照組(n=18)，CAPZ對(duì)照組(n=18

2、)，內(nèi)毒素血癥組(n=18)，CAP干預(yù)組(n=18)，CAPZ干預(yù)組(n=18);正常對(duì)照組:給小鼠腹腔注射生理鹽水，3h、8h、16h后麻醉活殺;CAP、CAPZ對(duì)照組:先分別兩組給小鼠皮下注射CAP(1mg/kg)、CAPZ（15mg/kg），30分鐘后腹腔注射生理鹽水，此后分別于3h、8h、16h麻醉后活殺;內(nèi)毒素血癥組:給小鼠腹腔注射LPS10mg/kg，構(gòu)建內(nèi)毒素血癥模型，分別于3h、8h、16h麻醉后活殺;CAP、CAPZ

3、干預(yù)組:先分別給兩組小鼠皮下注射CAP(1mg/kg)、CAPZ(15mg/kg)，30分鐘后腹腔注射LPS10mg/ml，分別于3h、8h、16h麻醉后活殺。以上各組麻醉活殺后取肺組織，-70℃保存。
　　 2.觀察各組小鼠在內(nèi)毒素血癥模型建立后在皮毛、呼吸、活動(dòng)及精神狀態(tài)方面的改變，光鏡下觀察各組小鼠肺組織病理變化情況，稱取小鼠肺組織重量，求出小鼠肺組織干濕比變化。
　　 3.實(shí)驗(yàn)一:采用ELISA法檢測(cè)各組小鼠肺組

4、織TNF-α、IL-6、IL-10以及SP、CGRP水平，RT-PCR法檢測(cè)各組小鼠肺組織TLR4mRNA和NF-κ B mRNA水平，Western blotting法檢測(cè)各組小鼠肺組織TLR4和NF-κB蛋白的水平。
　　 4.實(shí)驗(yàn)二:采用化學(xué)比色法檢測(cè)各組小鼠肺組織SOD和CAT活力，以及MDA水平， ELISA法檢測(cè)各組小鼠肺組織HO-1水平，RT-PCR法檢測(cè)各組小鼠肺組織Nrf2mRNA水平，Western blot

5、ting法檢測(cè)各組小鼠肺組織Nrf2的水平。
　　 結(jié)果:
　　 1.正常對(duì)照組和CAP對(duì)照組以及CAPZ對(duì)照組小鼠反應(yīng)靈敏，呼吸平穩(wěn)，黏膜紅潤(rùn)，皮毛光滑，行動(dòng)自如，其中CAP組在2h左右開始食欲大增，狂吃不止，CAPZ組食欲變化不明顯。內(nèi)毒素血癥模型組則在2h左右出現(xiàn)精神萎靡，呼吸急促，倦怠懶動(dòng)，反應(yīng)變慢，進(jìn)食減少，四肢水腫，其中下肢水腫稍重;8h上述癥狀加重，反應(yīng)遲鈍，可見眼部有較多分泌物，體溫降低，四肢發(fā)抖;16h

6、精神更加萎靡，刺激后無(wú)反應(yīng)，眼部因分泌物較多而無(wú)法睜開，口唇發(fā)紺，體溫較低，四肢冰冷。CAP干預(yù)組小鼠癥狀較內(nèi)毒素血癥組明顯減輕，而CAPZ干預(yù)組小鼠癥狀稍有加重。
　　 2.光鏡下觀察，正常對(duì)照組、CAP對(duì)照組以及CAPZ對(duì)照組肺組織結(jié)構(gòu)完整清晰，肺泡腔內(nèi)無(wú)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，肺間質(zhì)無(wú)滲出;膿毒癥組8h、16h可見肺泡大小不等，部分肺泡壁斷裂呈氣腫狀，部分肺泡萎陷，肺泡壁增寬，肺泡毛細(xì)血管擴(kuò)張，肺間質(zhì)見多行核炎癥細(xì)胞浸潤(rùn);與內(nèi)毒素血

7、癥組相比，CAP干預(yù)組肺泡壁毛細(xì)血管擴(kuò)張、炎細(xì)胞浸潤(rùn)及間質(zhì)水腫程度明顯減輕;CAPZ干預(yù)組無(wú)明顯加重。
　　 3.實(shí)驗(yàn)一:
　　 (1)內(nèi)毒素血癥組小鼠肺組織在3h、8h、16h的TNF-α較正常對(duì)照組水平均顯著升高(P＜0.05)，CAP對(duì)照組、CAPZ對(duì)照組TNF-α、IL-6、IL-10則無(wú)明顯變化(P＞0.05);與同時(shí)間點(diǎn)內(nèi)毒素血癥組相比，CAP干預(yù)組TNF-α、IL-6水平在3h、8h、16h顯著降低(P＜0

8、.05)，而CAPZ干預(yù)組TNF-α、IL-6則顯著升高(P＜0.05)，CAP干預(yù)組IL-10水平較內(nèi)毒素血癥組升高(P＜0.05)，而CAPZ干預(yù)組則降低(P＜0.05)。
　　 (2)內(nèi)毒素血癥組小鼠肺組織在3h、8h、16h SP、CGRP較正常對(duì)照組顯著升高，CAP對(duì)照組SP、CGRP也有明顯升高(P＜0.05)，但比內(nèi)毒素血癥組低(P＜0.05)，CAPZ對(duì)照組則有明顯降低;與同時(shí)間點(diǎn)內(nèi)毒素血癥組相比，CAP干預(yù)組S

9、P、CGRP顯著升高(P＜0.05)，而CAPZ干預(yù)組SP、CGRP則顯著降低(P＜0.05)。
　　 (3)內(nèi)毒素血癥小鼠肺組織在3h、8h、16h TLR4及其mRNA表達(dá)水平較正常對(duì)照組及其mRNA顯著升高(P＜0.05)，而CAP對(duì)照組、CAPZ對(duì)照組TLR4及其mRNA表達(dá)水平則無(wú)明顯變化(P＞0.05); CAP干預(yù)組、CAPZ干預(yù)組小鼠肺組織TLR4及其mRNA水平變化不明顯(P＞0.05)。內(nèi)毒素血癥組小鼠肺組織

10、在3h、8h、16h核內(nèi)NF-κ B表達(dá)水平較正常對(duì)照組顯著升高(P＜0.05)，而CAP對(duì)照組、CAPZ對(duì)照組核內(nèi)NF-κB表達(dá)水平則無(wú)明顯變化(P＞0.05); CAP干預(yù)組核內(nèi)NF-κ B顯著降低(P＜0.05)，CAPZ干預(yù)組核內(nèi)NF-κ B顯著升高(P＜0.05)。
　　 4.實(shí)驗(yàn)二:
　　 (1)內(nèi)毒素血癥組小鼠肺組織在3h、8h、16h CAT、SOD活力明顯低于正常對(duì)照組(P＜0.05)，且隨時(shí)間變化CA

11、T逐漸升高，SOD逐漸降低，CAP對(duì)照組、CAPZ對(duì)照組CAT、SOD活力則變化不明顯(P＞0.05);與內(nèi)毒素血癥組相比，CAP干預(yù)組CAT、SOD活力在8h、16h明顯升高(P＜0.05)，CAPZ干預(yù)組SOD活力則在8h、16h明顯降低(P＜0.05)，CAT則在16h明顯降低(P＜0.05)。內(nèi)毒素血癥組小鼠肺組織在3h、8h、16h MDA含量明顯高于正常對(duì)照組(P＜0.05)，CAP對(duì)照組、CAPZ對(duì)照組MDA含量則變化不明

12、顯(P＞0.05);與內(nèi)毒素血癥組相比，CAP干預(yù)組MDA含量在3h、8h、16h明顯降低(P＜0.05)，CAPZ干預(yù)組MDA含量則在3h、8h、16h明顯降低(P＜0.05)。
　　 (2)內(nèi)毒素血癥組小鼠肺組織在3h、8h、16h HO-1、Nrf2含量及Nrf2mRNA水平明顯高于正常對(duì)照組(P＜0.05)，CAP對(duì)照組和CAPZ對(duì)照組則無(wú)明顯變化(P＞0.05);與內(nèi)毒素血癥組相比，CAP干預(yù)組小鼠肺組織在8h、16h

13、 HO-1、Nrf2含量及Nrf2mRNA水平明顯升高(P＜0.05)，CAPZ干預(yù)組小鼠肺組織在8h、16hHO-1、Nrf2含量及Nrf2mRNA水平則明顯降低(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1.TRPV1激活不能降低內(nèi)毒素血癥小鼠TLR4水平，但能顯著降低核內(nèi)NF-κ B水平，降低下游TNF-α、IL-6水平，提高IL-10水平，升高SP、CGRP水平，減輕內(nèi)毒素血癥所致急性肺損傷的炎癥水平。