納米粒子吸附抗癌藥物的載體效應及其藥動學研究.pdf

1、目的：本實驗主要是觀察了載體納米粒子吸附抗癌藥物（ANTC）即卡波霉素（CBMC）的載體效應并測定其在大鼠體內(nèi)的藥代動力學參數(shù)。 方法：采用納米粒度儀測定了靶向載體NPC的表征：根據(jù)NPC對ANTC的吸附特性研究結果設計了具有特定載藥量的CBMC并進行了中試制備研究：使用HPLC法分析了CBMC的釋藥特性：采用改良寇式法分別測定了NPC、ANTC和CBMC經(jīng)腹腔注射和靜脈注射對小白鼠的急性毒性并比較了NPC、ANTC和CBMC的

2、LD50：采用MTT法評價了CBMC對體外培養(yǎng)的6種人癌細胞的細胞生長抑制作用，并計算了CBMC對6種細胞的IC50；采用6種動物腫瘤模型評價了CBMC的體內(nèi)抗腫瘤作用，運用電鏡技術和組織病理學方法初步觀察了NPC的腫瘤靶向作用；采用流式細胞術觀察了NPC對人癌細胞的細胞周期的影響，探討了NPC可能存在的對抗癌藥物的增效機制；測定了CBMC及ANTC經(jīng)腹腔注射后在大鼠體內(nèi)的藥代動力學特征及腹腔組織分布特點，并獲得了藥代動力學參數(shù)。

3、 結果： 1.經(jīng)高精度CPS納米粒度儀對NPC納米粒子表征，本實驗所用NPC平均粒徑為319±111 nm：。 2.NPC對ANTC有很強大的吸附作用，25℃時，NPC吸附ANTC約0.5h即可達到平衡，且達平衡時間與NPC： ANTC質(zhì)量比無關。NPC吸附ANTC的量M與溶液中游離ANTC濃度C符合經(jīng)公式172℃0.145（R=0.953），單位質(zhì)量NPC可吸附ANTC的量最高可達285mg/g。 3.根據(jù)N

4、PC吸附ANTC特點，建立了CBMC中試生產(chǎn)配方，并進行了中試制備，獲得3批次CBMC，共計954支混懸注射劑； 4.用改良寇式法測定了NPC、ANTC和CBMC腹腔注射及靜脈注射急性毒性，結果顯示，NPC腹腔注射后LD50>4000mg/kg；靜脈注射LD50約為308.52mg/kg；ANTC腹腔LD50約為5.83mg/kg，靜脈注射LD50約為4.79mg/kg； CBMC腹腔注射LD50約為122.91mg/kg，毒性

5、比含藥量相等的ANTC低約3.5倍。 5.采用MTT法評價了CBMC對體外培養(yǎng)的6人癌細胞的細胞生長抑制作用的結果顯示，NPC對體外培養(yǎng)的人癌細胞無明顯的抑制生長作用，CBMC對體外培養(yǎng)的多種人癌細胞均有較強的抑制生長作用，具有較好的劑量效應關系，且其作用均顯著高于相等濃度的游離ANTC組。經(jīng)計算，CBMC作用于人胃癌BGC—823細胞48h時IC50為41.8μg/mL、人肝癌HepG—2細胞48h時IC50為31.4μg/m

6、L、人肝癌7701細胞48h時IC50為97.08μg/mL、人肺鱗癌H460細胞48h時IC50為256.14μg/mL、人非小細胞肺癌H1299細胞48h時IC50為129.13μg/mL、人胰腺癌JF305細胞48h時IC50為58.60μg/mL。 6.建立了6種腫瘤移植模型，包括白血病移植模型、腹水瘤移植模型及實體瘤移植模型評價CBMC的體內(nèi)抗腫瘤作用。體內(nèi)實驗結果顯示，CBMC對6種動物腫瘤模型均有顯著的治療作用，且

7、具有較好的劑量—效應關系。含ANTC量相等的6mg/kgCBMC組其生命延長率及抑瘤率均顯著高于1mg/kgANTC組。低劑量CBMC（2mg/kg）組其生命延長率及抑瘤率與1mg/kgANTC組無顯著性差異。結果提示NPC的載體效應，即NPC由于其局部滯留性、腫瘤附著性及淋巴趨向性，可將ANTC滯留于給藥局部或經(jīng)過淋巴系統(tǒng)導向腫瘤組織，在腫瘤局部形成藥物高濃度并經(jīng)過緩慢釋放維持藥物濃度，使藥物直接作用于腫瘤組織。 7.部分腫瘤

8、病灶的病理切片及TEM觀察結果顯示，NPC可附著于腫瘤組織并進入腫瘤病灶，進而進入腫瘤細胞釋放藥物并殺傷腫瘤細胞，其細胞內(nèi)靶分子主要為細胞核、線粒體、溶酶體。 8. NPC對BGC—823細胞周期影響的結果顯示，大劑量NPC可將腫瘤細胞抑制于S期，NPC可能具有對化療藥物的增效作用。 9.建立了CBMC的HPLC測定方法；獲得了CBMC和ANTC經(jīng)腹腔注射后在大鼠體內(nèi)的藥代動力學參數(shù)及腹腔組織分布特點，結果顯示，CBMC