紫杉醇與四君子湯治療鼻咽癌動物實驗研究.pdf

1、研究背景:
　　 鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)是我國南方及東南亞地區(qū)常見的惡性腫瘤之一,尤以廣東省珠江三角洲一帶多見,嚴重危害我國人民的健康。目前國內外對NPC的發(fā)病因為、易感性和癌變機理進行了廣泛的研究,認為NPC的發(fā)生是一個多因素、多階段的過程,與EBV感染、化學促癌物和/或致癌物、及遺傳等因素有關。臨床上大部分鼻咽癌病例早期就出現(xiàn)頸部淋巴結轉移,晚期NFC患者主要出現(xiàn)肝轉移和骨轉移,是

2、導致患者死亡的主要因為。手術治療、放射治療、化學治療是現(xiàn)階段治療NPC的主要治療手段,隨著醫(yī)療技術的發(fā)展,對該病的檢測和治療都得到不斷改善,但NPC患者的五年生存率仍然不超過60％。
　　 紫杉醇為一種植物藥(paclitaxel,商品名Taxol),從紅豆杉的樹皮、樹根及枝葉中提取,催化微管蛋白迅速合成微管并結合到微管上起穩(wěn)定和防止微管解聚的作用,從而避免癌細胞的快速分裂,使其停止在G2期和M期直到死亡。紫杉醇也作用于巨噬細胞

3、上的腫瘤壞死因子(TNF)受體,促使釋放白細胞介素(IL)-1、TNF-2、IL-6、干擾素(IFN)-1、IFN-2對腫瘤細胞起殺傷或抑制腫瘤細胞遷移作用。毒副作用主要表現(xiàn)為:骨髓抑制、惡心嘔吐、神經毒性、關節(jié)肌肉疼痛、脫發(fā)。
　　 四君子湯組方源自于宋《太平惠民和劑局方》,是益氣健脾的經典方劑,方中人參補益中氣,健脾和胃為君:白術溫脾燥濕為臣:佐以茯苓甘淡滲濕健脾,苓術合用,健脾除濕之功更強:使以甘草養(yǎng)胃和中。全方共奏健脾和

4、胃,益氣養(yǎng)血之功效,具有治療榮衛(wèi)氣虛,臟腑怯弱的作用?，F(xiàn)代醫(yī)學研究認為,人參健脾益氣作用較強,提高特異性和非特異性免疫功能最優(yōu):白術健脾益氣作用較強,尤其能夠明顯升高血清總蛋白:茯苓有健脾益氣作用,但無增加脾虛模型動物體質量的作用。
　　 綠色熒光蛋白基因是從生物發(fā)光的水母克隆出來的基因,它的cDNA編碼283個氨基酸殘基,不需要其它蛋白輔助、不需要底物、也不需要其它因子輔佐就能發(fā)出綠色熒光。人們采用GFP穩(wěn)定轉染腫瘤細胞來跟蹤

5、腫瘤形成及演進的過程,極大地改善和提高了腫瘤特別是微小腫瘤在新鮮組織的可視化能力。GFP廣泛應用于可視化的腫瘤動物模型,極大地推動了腫瘤的生長、發(fā)展規(guī)律的認識和研究。
　　 在研究腫瘤的過程中,在實驗動物體內復制出與人類腫瘤發(fā)生發(fā)展十分相似的模型也是一個非常有用的方法。原位移植技術的開展,使許多更貼近臨床特征的腫瘤動物模型得以建立,包括自發(fā)骨轉移的原位移植的前列腺癌、乳腺癌和肺癌,自發(fā)肝臟和淋巴結轉移的結腸癌模型,以及胰腺癌、胃

6、癌、卵巢癌、膀胱癌和腎癌的模型。合適的人類腫瘤動物模型能驗證人類腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲、轉移的過程并能夠開展有效的實驗干預,從而彌補了人體腫瘤僅能通過活檢、手術標本和尸檢等進行分析的不足。但是這仍不能滿足人們從活體上觀察研究腫瘤演進過程的要求。
　　 基因芯片(DNA芯片,DNA微陣列)技術、蛋白質組技術及生物信息學(bioinformatics)的技術的迅速興起和應用,為分子生物學和病理學的有機結合提供了絕好的機遇。面對數(shù)量龐

7、大的遺傳信息,建立新型雜交和測序方法以進行高效、快速的檢測和分析顯得尤為重要。以基因芯片為代表的生物芯片技術的崛起為解決上述問題提供了光輝的前景。由于它具有體積小、包含信息豐富以及實驗操作簡便的特點,使得人們可以同時檢測同一組織或不同組織在不同生理和病理條件下成千上萬個基因的表達水平,闡明信號通路與基因表達之間的相互作用關系。
　　 研究目的:
　　 目前鼻咽癌的臨床治療效果仍差強人意,結構復雜難以有效手術切除、放射治療

8、與化學治療中難以避開的毒副作用,均制約著患者生存質量的提高與鼻咽癌五年生存率進展。所以,以中西醫(yī)結合的思路,將化療藥物與健脾補中益氣中藥聯(lián)合用于鼻咽癌治療,以期提高患者生存質量及腫瘤治療效果,并進行基因表達譜分析,尋找鼻咽癌治療候選基因就顯得尤為重要。
　　 方法:
　　 1、構建穩(wěn)定表達綠色熒光蛋白的鼻咽癌細胞系。
　　 2、建立可視裸鼠鼻咽癌模型。
　　 3、紫杉醇、四君子湯藥物干預,尋求臨床治療鼻咽

9、癌化療過程中西藥與中藥結合的實驗證據。
　　 4、構建DNA基因芯片,尋找陽性對照組與聯(lián)合用藥組的差異表達基因,從而縮小鼻咽癌治療的分子標志范圍。
　　 結果:
　　 一、構建鼻咽癌細胞系CNE-GFP及裸鼠模型。
　　 二、藥物干預后指標檢測。
　　 以上實驗結果表明:紫杉醇單藥可有效殺傷腫瘤細胞,其毒副作用不可避免地使力竭后氧分壓下降、血BUN值升高；對外周血細胞、血紅蛋白、血清乳酸、免疫功能

10、、胃腸運動均下降。四君子湯可增強機體的外周血細胞計數(shù),改善體液免疫功能。四君子湯與紫杉醇聯(lián)用,對各項指標均有顯著效果,RBC計數(shù)、淋巴細胞計數(shù)、血紅蛋白、血清乳酸、最初60秒速度、脾細胞抗體、胃殘留率與正常對照組無差異。由此可以推測,紫杉醇與四君子湯聯(lián)合應用治療中晚期鼻咽癌,可以發(fā)揮各自優(yōu)勢且協(xié)同作用,通過抑制腫瘤細胞增殖、提高機體免疫力等途徑對抗腫瘤細胞生長,并改善血紅蛋白含量、血清乳酸含量、機體攜氧運氧能力、增加血細胞計數(shù)、對抗疲勞

11、,從而降低化療周期中的毒副作用,在臨床中可有效改善患者生存質量。
　　 三、構建基因表達譜,尋找與鼻咽癌治療有關基因。
　　 得到差異表達的基因共2620個,其中差異表達在2倍以上的基因281個。對這281個基因進行基因功能分析、信號通路分析、MILANO文獻分析,得到可能與鼻咽癌治療關系密切的基因24個。這24個基因與紫杉醇、四君子湯治療有關。
　　 結論
　　 1、建立穩(wěn)定表達綠色熒光蛋白鼻咽癌細胞株

12、CNE-GFP,生長曲線、運動能力實驗、侵襲能力實驗、同質黏附實驗、異質黏附實驗證明CNE-GFP細胞較其母系CNE細胞生物學特性并無改變。
　　 2、裸鼠皮下注射鼻咽癌細胞CNE-GFP懸液,約兩周左右可看到瘤塊形成。
　　 3、紫杉醇單藥可有效殺傷腫瘤細胞,其毒副作用不可避免地使力竭后氧分壓下降、血BUN值升高；使外周血細胞、血紅蛋白、血清乳酸、免疫功能、胃腸運動下降。
　　 4.四君子湯可增強機體的外周血細

13、胞計數(shù),改善體液免疫功能。
　　 5.四君子湯與紫杉醇聯(lián)用,RBC計數(shù)、淋巴細胞計數(shù)、血紅蛋白、血清乳酸、最初60秒速度、脾細胞抗體、胃殘留率與正常對照組無差異。由此可以推測,紫杉醇與四君子湯聯(lián)合應用治療中晚期鼻咽癌,可以抑制腫瘤細胞增殖、提高機體免疫力等途徑對抗腫瘤細胞生長,并改善血紅蛋白含量、血清乳酸含量、機體攜氧運氧能力、增加血細胞計數(shù)、對抗疲勞,從而降低化療周期中的毒副作用,可有效改善生存質量。
　　 6.構建鼻