組織工程膠原載體的制備及相關研究.pdf

1、創(chuàng)傷、腫瘤、感染等原因導致骨折以及骨缺損發(fā)生率不斷增高，常常需要修復重建。尤其是骨缺損的治療一直是骨科面臨的一個難題。骨缺損的主要治療方法如自體骨移植、同種異體骨移植、異種骨移植等都存在一定的缺陷。隨著組織工程的發(fā)展，人工骨移植修復骨缺損顯示出了更多的優(yōu)點。膠原是骨的主要成分之一，具有諸多性能：在成熟組織中起結構作用，對發(fā)育中組織起定向作用；具有高張力、低延展性、纖維定向性、可控制的交聯(lián)度；極好的生物相容性、弱甚至無抗原性、植入體內無排

2、異反應、細胞親和力高、可刺激細胞增殖、分化；體內可降解且可調控降解的速度，降解產物為氨基酸或小肽，可作為組建細胞的原料或通過新陳代謝排出。根據組織工程研究的需要，本研究擬從多種生物原料中制備新型膠原產品。
　　1．從四種生物原料中制備高純度膠原
　　[目的]從4種生物原料中制備高純度Ⅰ型膠原，滿足骨組織工程應用的需要。
　　[方法]分別以牛皮質骨、牛跟腱、豬跟腱和豬皮為原料，采用酸性條件下胃蛋白酶限制性酶解法經過粉碎、

3、脫鈣、脫脂、抽提、鹽析，復溶透析等步驟提取膠原，計算提取率。
　　[結果]從四種生物原料中經過上述步驟均可以獲得Ⅰ型膠原，超過常規(guī)方法。
　　[結論]限制性酶解法可以從四種生物原料中獲得較高產量的膠原產品，具有良好的應用前景。
　　2．生物源性膠原成分分析與鑒定
　　[目的]對從4種生物原料中制備的Ⅰ型膠原進行成分分析與鑒定，并與Sigma公司產品進行對比。
　　[方法]采用酸性條件下胃蛋白酶限制性酶解法從

4、牛皮質骨、牛跟腱、豬跟腱和豬皮中提取的Ⅰ型膠原用紫外吸光度、氨基酸分析、SDS-PAGE電泳進行鑒定，計算純度，同時與Sigma公司產品進行比較。
　　[結果]本法所提膠原的最大紫外光吸收波長為230nm，氨基酸分析、電泳鑒定符合Ⅰ型膠原特征。牛皮質骨所提膠原純度最高（96.12％），優(yōu)于Sigma公司產品。
　　[結論]通過限制性酶解法可以從4種生物原料中制備高純度Ⅰ型膠原產品，其中以牛皮質骨膠原最好。
　　3．組織

5、工程膠原支架生物特性研究
　　[目的]對提取的高純度骨膠原作為組織工程支架應用進行細胞相容性和生物降解性的研究。
　　[方法]用提取并經鑒定的高純度Ⅰ型骨膠原包被玻片同時與骨髓基質干細胞培養(yǎng)，觀察細胞粘附率、細胞毒性，并繪制細胞增殖曲線。同時用高純度Ⅰ型骨膠原制備支架，經過京尼平交聯(lián)后植入小鼠體內觀察生物降解性。
　　[結果]高純度Ⅰ型骨膠原細胞粘附率高、無細胞毒性、能促進細胞增殖，經過京尼平交聯(lián)的膠原支架植入小鼠體內