鱔魚、泥鰍顎口線蟲感染調查及分類鑒定與LAMP方法的建立.pdf

1、顎口線蟲(Gnathostoma)是食源性人畜共患性寄生蟲，人食入生的或未熟的感染顎口線蟲的淡水魚，可引起人的顎口線蟲?。╣nathostomiasis）。顎口線蟲病可引起人的移行性皮下包塊，還可侵襲深部組織和器官，如肺、眼、肝、腎、神經系統等，引起嚴重癥狀，甚至可導致死亡。此病是一種新興的疾病，患病人數日益增加，在某些國家和地區(qū)還發(fā)生過暴發(fā)流行的情況，隨著人口流動、文化以及國際貿易全球化，顎口線蟲病呈現全球化的趨勢，已有非流行地區(qū)的游

2、客在流行地區(qū)感染顎口線蟲病，或者消費進口的民族風味食品而感染顎口線蟲病的報道。而且，顎口線蟲病在很多國家和地區(qū)的感染情況是被低估的。目前，此病還沒有根治的方法，很多病例只能得到緩解，所以日益受到醫(yī)學上的重視，聯合國糧農組織（FAO）已將其列為重要的致病因子。本文從進口黃鱔中顎口線蟲的檢疫入手，進行了顎口線蟲病的流行病學調查，建立了顎口線蟲的PCR鑒定方法，同時建立了顎口線蟲LAMP檢測方法，為顎口線蟲的鑒定提供了有效方法，并對顎口線蟲病

3、病原的的診斷、預防和控制提供了有力的技術支持。
　　1.顎口線蟲的流行病學調查
　　對2015年9月-12月入境的19批次黃鱔進行調查，共檢出11批顎口線蟲陽性，批次陽性率為57.9％。對廣州市場上的養(yǎng)殖黃鱔、泥鰍進行調查，未檢出陽性結果，對廣州白云區(qū)部分池塘內的野生黃鱔進行調查，未檢出陽性結果；對四川、重慶、湖北、黑龍江的黃鱔和泥鰍進行調查，也未發(fā)現顎口線蟲；對福建的黃鱔和泥鰍進行調查，在黃鱔中發(fā)現顎口線蟲，說明了國內顎口

4、線蟲的存在。
　　2.蟲種鑒定
　　從形態(tài)學和分子生物學角度，對入境黃鱔中的部分批次的顎口線蟲進行鑒定，利用Genebank上的顎口線蟲COX1序列設計特異性引物，對蟲體DNA進行PCR擴增后，連接到T克隆載體上送英濰捷基公司測序，將測序結果與Genebank上的顎口線蟲COX1序列進行比對。結果為：鑒定的顎口線蟲全部為棘顎口線蟲。此方法適用于一般實驗室的檢測。
　　3.顎口線蟲LAMP檢測方法的建立
　　根據顎

5、口線蟲28S序列的保守區(qū)設計特異性LAMP引物，并設計LB、LF兩個環(huán)引物，加速反應，對顎口線蟲進行擴增，并進行了特異性、靈敏度、重復性和穩(wěn)定性測試。用特異性引物對棘口吸蟲、迭宮絳蟲、異尖線蟲、泡狀帶絳蟲、胃瘤線蟲、宮脂線蟲DNA模板進行擴增，均未擴增，表明該引物有良好的特異性；將目標基因克隆到T載體質粒上，用大腸桿菌對質粒繁殖后，提取質粒，將質粒10倍稀釋后進行測試，其檢測限為1 fg/μL；對1 fg/μL濃度的質粒進行15次重復試