膀胱癌干細(xì)胞分離、鑒定與基因修復(fù)實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　 “腫瘤干細(xì)胞學(xué)說(shuō)”認(rèn)為腫瘤組織中存在的腫瘤干細(xì)胞是腫瘤發(fā)生、發(fā)展的主要原因。腫瘤干細(xì)胞（Cancer stem cell，CSC）的提出為基因靶向治療找到了靶細(xì)胞。幾種人類腫瘤干細(xì)胞已經(jīng)被成功分離鑒定，但膀胱癌干細(xì)胞仍未被分離鑒定。本實(shí)驗(yàn)在前期工作成果的基礎(chǔ)上，依據(jù)暢繼武教授的“兩類癌”理念和30余年的相關(guān)研究，進(jìn)一步驗(yàn)證膀胱癌干細(xì)胞亞群起始和維持腫瘤的能力，并且對(duì)膀胱癌干細(xì)胞相關(guān)基因Bmi-1進(jìn)行初步的基因修復(fù)探

2、討，為最終分離鑒定膀胱癌干細(xì)胞和膀胱癌基因靶向治療打下實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　 方法：
　　 利用免疫磁珠分選技術(shù)，分選EMA-CD44v6+亞群細(xì)胞，進(jìn)行該亞群細(xì)胞的裸鼠荷瘤實(shí)驗(yàn)；通過(guò)成瘤細(xì)胞傳代培養(yǎng)和成瘤標(biāo)本病理學(xué)實(shí)驗(yàn)，分析該亞群細(xì)胞起始和維持腫瘤的能力。
　　 利用醫(yī)學(xué)生物學(xué)技術(shù)，對(duì)膀胱癌干細(xì)胞相關(guān)基因Bmi-1進(jìn)行基因信息分析，發(fā)現(xiàn)Bmi-1有意義的基因突變；利用RDO基因修復(fù)工具，對(duì)Bmi-1基因突變進(jìn)行原位修

3、復(fù)；通過(guò)基因修復(fù)后EMA-CD44v6+亞群細(xì)胞的裸鼠荷瘤實(shí)驗(yàn)，初步評(píng)估基因修復(fù)效果。
　　 結(jié)果：
　　 將EMA-CD44v6+亞群細(xì)胞最小致瘤劑量降至5.0×103個(gè)，病理學(xué)實(shí)驗(yàn)支持該亞群細(xì)胞的腫瘤干細(xì)胞特性；Bmi-1基因第6個(gè)外顯子上985bp處G-A點(diǎn)突變是有意義的基因突變；修復(fù)后EMA-CD44v6+亞群細(xì)胞最小致瘤劑量為1.0×104個(gè)，病理學(xué)實(shí)驗(yàn)證實(shí)基因修復(fù)使得該亞群成瘤能力有所減弱。
　　 結(jié)