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1、廈門(mén)大學(xué)碩士學(xué)位論文ADPN基因構(gòu)建、蛋白表達(dá)及其對(duì)宮頸癌Hela細(xì)胞生長(zhǎng)的影響姓名：謝蓮英申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：細(xì)胞生物學(xué)指導(dǎo)教師：顏江華20070601GeneConstruction、ExpressionofADPNandItsInfluencesonHelaCellsGrowthAbstract：ThereductionofexpressionlevelofADPNhasbeenreportedtobeinverselyass
2、ociatedwithallincreasedriskofbreastcanc％endometrialcane％prostatecancercolorectalcancerandgastriccancerTheADPNlevelcallbeasanimportantindexfordetectionofdiseasesHowevertherelationshipbe鉚eenADPNandcervicalcancerhasnotbeenr
3、eportedTherefore，westudiedwhetherADPNinfluencestheproliferationofcervicalcancerHelacellsTheADPNgenewasobtainedbyoverlappingPCRtechniqueTheexpressionvectorpET22b()／ADPNWasconstructedandtransformedintoEcoliBL21(DE3)TheADPN
4、proteinwasexpressedasinclusionbodieswitlltheyieldofmorethan30％oftotalbacterialproteinsunderIPTGinductionTheexpressionproductswere。purifiedbyNi2NTAaffinitycolumn，SDS—PAGEanalysisshowedthattherelativemolecularweightofADPNi
5、s30kDawhichWasconsistentwiththetheoreticallypredictedvalueTheMTTassayshowedthatADPNcaninhibittheendothelialcellproliferationatsubphysiologicalconcentrationsTodetectthemechanismofADPNontumorcells，wedetectedtheexpressionof
6、ADPNreceptorsbyRTPCRandFITCfluorescencelabeledmethodinMGC803、BGC823、HT29、HelacellsMITassayanalyzedtheinfluenceofADPNontheproliferationrateofthetheseCanCercells，F(xiàn)lowcytometryanalyzedtheinfluenceofADPNonthecellcycle，RTPCRd
7、etectedtheinfluenceofADPNontheexpressionofthecellcycleregulatorsandapoptosisgene，westernblottinganalyzedthephosphorylationofAMPKinducedbyADPNinHelacellsTheresultsshowedmatADPNreceptorsareexpressedinMGC一803、BGC一823、HT29、H
8、elacellsADPNWassensitivetotheHelacells，O1Itg／mlADPNCaninhibitthegrowthofHelacellsandlOItg／mlADPNinducedHelacellstoapoptosisADPNdownregulatedtheexpressionofcellpositiveregulatorscyclin—D1andcmyc，upregulatedtheexpressionof
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