強迫癥GWAS及候選基因與早年創(chuàng)傷交互作用研究.pdf

1、目的:強迫癥是一種常見難治的非精神病性障礙,其發(fā)病原因復雜,目前普遍認為是多基因的傳遞模式,即由多個微效基因協(xié)同并與環(huán)境因素共同作用導致的疾病。強迫癥的全基因組關(guān)聯(lián)研究(GWAS)[包括單核苷酸多態(tài)(SNP)和CNV全基因組關(guān)聯(lián)]至今還未見報道,本研究對漢族早發(fā)性強迫癥進行CNV和SNP的全基因組關(guān)聯(lián)研究并在較大樣本中進行驗證,探索拷貝數(shù)變異在強迫癥病因中的作用。同時,強迫癥是一種異質(zhì)性障礙,本研究主要比較中國人群早發(fā)強迫癥與晚發(fā)強迫癥

2、的特征,進一步比較早發(fā)性和晚發(fā)性強迫癥的差異及可能機制。同時評估早年創(chuàng)傷經(jīng)歷,探討遺傳變異與早年創(chuàng)傷交互作用在強迫癥發(fā)病中的作用。
　　方法:病例組來自2007-2011年在上海市精神衛(wèi)生中心心理咨詢門診就診的符合DSM-Ⅳ強迫癥診斷標準的患者,共入組602例,其中男性339例,女性263例,506例來自廣告招募的健康對照。
　　采用Affymetrix Genome-Wide Human SNP Nsp/Sty6.0芯片(

3、包含906,600SNPs和945,826 CNV探針)對30例男性早發(fā)性強迫癥和30例年齡性別相匹配的健康對照DNA樣本進行了全基因組基因分型。用Genotyping Console軟件從CEL,文件中得到CNState(DNA拷貝數(shù)),Affymetrix GeneChip SNP6.0.QC軟件進行質(zhì)量控制,STRUCTLIRE version2.2軟件進行人群分層分析?？ǚ綑z驗比較不同拷貝數(shù)變異的頻率分布在病例和健康對照兩組中是

4、否具有統(tǒng)計學差異,用FDR方法多重檢驗校正。
　　挑選芯片陽性發(fā)現(xiàn)的兩個區(qū)域,對照公共數(shù)據(jù)庫,對其對應基因的拷貝數(shù)變異在580例強迫癥和506例健康對照中進行驗證,主要采用實時定量PCR對兩區(qū)域的拷貝數(shù)缺失和擴增進行檢測。采用ETI-SF量表對其中的326例強迫癥和480例健康對照進行早年創(chuàng)傷經(jīng)歷的評定。應用Mann-Whitney非參數(shù)檢驗和spearman相關(guān)分析兩個基因拷貝數(shù)變異、早年創(chuàng)傷與強迫癥發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。同時,比較早

5、發(fā)性強迫癥和晚發(fā)性強迫癥在基因拷貝數(shù)變異和早年創(chuàng)傷經(jīng)歷的差別。最后多因素logistic分析強迫癥相關(guān)的病因機制,并應用GMDR軟件進行了基因和環(huán)境交互作用在強迫癥發(fā)生中作用進行分析。
　　結(jié)果:1)全基因組關(guān)聯(lián)芯片研究:病例和對照組年齡無差異(p=0.09),且均不存在人群分層現(xiàn)象(λ=1.0056)。通過應用Affymetrix GeneChip SNP6.0.QC軟件進行質(zhì)量篩查后,1809088個SNP位點進入統(tǒng)計分析,其

6、中常染色體位點1716863個,X染色體位點84080個,將在所有樣本中的常染色體CNState=2的位點過濾,過濾后的位點一共是70245個,其中在病例組和對照組有顯著差異(p＜0.00011的基因拷貝數(shù)變異位點共81個,合并相鄰區(qū)域后,7個區(qū)域在患者和對照中具有統(tǒng)計學差異,其中最明顯的兩個區(qū)域為1p31.1和20p13。1p31.1區(qū)域上相關(guān)的基因是編碼神經(jīng)生長調(diào)節(jié)因子的NERG1,10/30例患者出現(xiàn)了該區(qū)域拷貝數(shù)的擴增,健康對照

7、中則未發(fā)現(xiàn)。20p13區(qū)域上相關(guān)的基因是編碼信號調(diào)節(jié)蛋白的SIRPB1,有13/30病例出現(xiàn)了該區(qū)域拷貝數(shù)的缺失,而健康對照中未發(fā)現(xiàn)。
　　2)驗證實驗:定量PCR對兩區(qū)域的拷貝數(shù)缺失和擴增在580例強迫癥和506例健康對照中進行了檢測,證實了芯片研究的結(jié)論,其中1p31.1區(qū)域的NEGR1基因在病例組存在較多的拷貝數(shù)擴增(t=7.03,p＜0.001);20p13區(qū)的SIRPB1基因在強迫癥患者中出現(xiàn)較多的拷貝數(shù)缺失(t=-12

8、.85,p＜0.001),且與晚發(fā)組相比,早發(fā)性強迫癥出現(xiàn)拷貝數(shù)缺失更顯著,兩組之間差異有統(tǒng)計學差異(平均差值為0.67(SD=0.28),p=0.017)。
　　3)相對于對照組,強迫癥患者早年創(chuàng)傷量表總分更高(3.21±3.28 vs.3.90±3.27,p＜0.001),而且四個維度得分也均高于對照組,男女性別經(jīng)歷的創(chuàng)傷種類及數(shù)量上無明顯差異,但是女性強迫癥患者性創(chuàng)傷多于女性患者(0.33±0.69vs.0.16±0.45,

9、p=0.049)。與晚發(fā)組相比,早發(fā)性強迫癥經(jīng)歷更多的早年創(chuàng)傷(除了性創(chuàng)傷外),兩組之間差異有統(tǒng)計學差異(p值均小于0.01)。
　　4)NEGR1基因拷貝數(shù)擴增和SIRPB1基因拷貝數(shù)缺失與Y-BOCS評分存在顯著的正相關(guān),早年創(chuàng)傷總分及各維度分值(除外性創(chuàng)傷)與強迫癥患者的起病年齡成負相關(guān)(p≤0.001)。Logistic回歸分析發(fā)現(xiàn)性別,NEGR1基因,SIRPB1基因,及情感創(chuàng)傷在強迫癥發(fā)病中起到重要作用。
　　5

10、)通過GMDR軟件對基因.環(huán)境交互作用的研究,發(fā)現(xiàn)最優(yōu)模型為情感創(chuàng)傷*SIRPBl*NEGR.1構(gòu)建的交互模型,因為其交叉檢驗一致性高(10/10),檢驗樣本準確度較高(0.75),該交互作用的危險度OR值為11.08(95％CI=2.34,52.54),兩組間卡方檢驗也是有顯著差異(X2=9.79,p=0.002)。
　　結(jié)論:1p1.1和20p13區(qū)域的拷貝數(shù)擴增和缺失與強迫癥發(fā)病相關(guān),這兩個區(qū)域中的NEGR1和SIRPB1在