銀杏內(nèi)酯B的藥理性預適應對星形膠質(zhì)細胞缺血損傷的作用機制.pdf

1、目的：觀察銀杏內(nèi)酯B(GinkgolideB)對離體培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細胞缺血損傷的作用，從藥理性預適應(PP)角度探討其作用機制。 方法：采用新生小鼠大腦皮層純化的星形膠質(zhì)細胞，加銀杏內(nèi)酯B預處理(120μM，24h)或模擬缺血O.5h、3h(無糖Hank's，1％02)誘導缺血預適應后，經(jīng)24h缺血(無糖Hank's，1％02)，通過免疫熒光細胞化學、Hoechst33342熒光染色等觀察細胞形態(tài)變化和凋亡的發(fā)生；MTT、LDH

2、檢測細胞活性；蛋白免疫印跡法(Westem-blot)分析促紅細胞生成素(Erythropoietin,EPO)、膠質(zhì)原纖維酸性蛋白(glialfibrillaryacidicprotein，GFAP)、bystin、磷酸化-Bad蛋白(phosphorylated．Bad，p.Bad)及磷酸化-ERK(p.ERK)、磷酸化-Ser+-GSK-3β(phosphorylated-glycogensynthasekinase-3，p-Se

3、r9-GSK-3β)等表達量的變化。 結(jié)果： (1)星形膠質(zhì)細胞經(jīng)120μM銀杏內(nèi)酯B處理24h或經(jīng)缺血預適應O．5h或3h(無糖Hank's，1％02)的作用，變成有反應性特征的星形膠質(zhì)細胞，胞體增大，突起延長，交錯；細胞活性增高；且bystin，EPO，p-Bad，p．ERK，p-Ser9-GSK-3β等表達量均增加； (2)缺血24h后，細胞變稀疏，胞體變小，突起減少，斷裂；活性降低；Hoechst3334

4、2熒光染色可見大量的致密濃染的核仁；bystin，EPO，p．Bad，p．ERK，p．Ser9-GSK一3p表達都明顯減少； (3)經(jīng)過120μM銀杏內(nèi)酯B處理24h或缺血預適應O．5h與3h再進行缺血24h，細胞形態(tài)，活性均有所恢復；H∞chst33342熒光染色少見有致密濃染的核仁；EP0，bystin，p-Bad，p—ERK，p．Ser9-GSK．3β的表達量增加； (4)缺血預適應、化學性缺氧及銀杏內(nèi)酯B都能誘導

5、星形膠質(zhì)細胞變成反應性星形膠質(zhì)細胞，bystin可作為反應性星形膠質(zhì)細胞靈敏的標記物； (5)經(jīng)銀杏內(nèi)酯B或缺血預適應作用增高表達的112p．B甜，136p．Bad能分別被信號通路MEK/ERK的抑制劑PD98059與P13K/AKT/GSK-3β的抑制劑LY294002所抑制。 結(jié)論：銀杏內(nèi)酯B的藥理性預適應作用與缺血預適應相類似，對星形膠質(zhì)細胞的缺血損傷有明顯的保護作用，二者均通過誘導生成反應性星形膠質(zhì)細胞，增加有神