腫瘤的早期診斷——端粒酶活性的檢測.pdf

1、中國醫(yī)科大學碩士學位論文腫瘤的早期診斷——端粒酶活性的檢測姓名：郝鳳進申請學位級別：碩士專業(yè)：生物化學與分子生物學指導教師：于秉治2001.4.1關蛋白(TP1TLPI).最近有學者發(fā)現(xiàn):端粒酶三各組分中hTRT的逆轉錄活性是端粒酶活性的決定因素，故檢TmRNA可反應端粒酶的活性，進而對惡性腫瘤做出判斷文根據(jù)文獻報道的hTRTcDNA序列設計引物，建立了hTRTcDNA的RT一KR檢測法，并初步研究了腫瘤脫落細胞的hTRTmRNA的表達

2、情況。材料與方法1本實驗建立了RT一PCR方法，探討了反應的擴增動力學，檢測了大量的尿液，胸水的端粒酶活性。1.材料腫瘤患者的尿液和胸水均來自于中國醫(yī)大附屬一院患者。2.方法:2.1總RNA提取:取尿液或胸水50m1，用TRIzol，異丙醇，抓仿等提取總RNA，提出的總RNA用20川DEPC處理過的水稀釋后，取2討留做進行紫外檢測，其余的分裝后放在一20℃保存。2.2用紫外分光光度計進行紫外測定總RNA含量及純度。2.3CDNA第一鏈的

3、合成，用反轉錄試劑盒將總RNA轉錄成cDNA第一鏈，反應體積為10貝。2.4擴增hTRTcDNA片段，用反轉錄產(chǎn)物為模板，用PCR方法擴增hTRTcDNA片段，其引物為:上游引物序列為5’一cTGCACTGGCTGAGTGT一3下游引物序列為5’一CTGAACAGTGCCTTCACCCT一3反應總體積為25wlo2.5電泳檢側PCR擴增產(chǎn)物，擴增后的產(chǎn)物加樣到12%的聚丙烯酞胺凝膠中，電壓80V90分鐘，之后用EB(澳化乙錠)染色。實驗