凋亡抑制在口腔表皮樣癌耐藥細(xì)胞株KBv200耐藥機(jī)制中的作用及其逆轉(zhuǎn).pdf

1、河北醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文凋亡抑制在口腔表皮樣癌耐藥細(xì)胞株KBv200耐藥機(jī)制中的作用及其逆轉(zhuǎn)姓名：張金廷申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：人體解剖與組織胚胎學(xué)指導(dǎo)教師：崔慧先20040401中文摘要ISH)的方法檢測(cè)抗凋亡基因Bcl2、Cmyc在KB及KBv200細(xì)胞中的表達(dá)差異，以期發(fā)現(xiàn)抗凋亡基因在KBv200細(xì)胞耐藥中的作用。隨著人們對(duì)耐藥機(jī)理的深入研究，越來(lái)越多的耐藥逆轉(zhuǎn)劑被開發(fā)出來(lái)，但或因副作用大，或因體內(nèi)作用逆轉(zhuǎn)效果不明顯，或因價(jià)格昂貴

2、等種種原因，迄今為止，人們尚未發(fā)現(xiàn)一種理想的耐藥逆轉(zhuǎn)劑，中藥的資源豐富，至今已達(dá)一萬(wàn)余種，藥理作用廣泛，而且許多中藥本身即有抗癌作用，提示在中藥中篩選MDR逆轉(zhuǎn)劑具有很大的優(yōu)勢(shì)，苦參堿(Matrine)為中藥苦參的有效成分之一，化學(xué)分子式為C25H24N2o，可人工合成，最近發(fā)現(xiàn)苦參堿體外具有抗腫瘤的作用，可以抑制腫瘤細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移，促進(jìn)凋亡，以及誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞分化，但仍有諸多機(jī)制不明，因此，本研究應(yīng)用MTT法、流式細(xì)胞術(shù)、瓊脂糖DNA電

3、泳等方法觀察了苦參堿對(duì)KB及KBv200細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)的作用。材料與方法:1凋亡抑制在人口腔上皮癌KBv200細(xì)胞耐藥中的作用人口腔表皮樣癌KB細(xì)胞系及其VCR耐藥細(xì)胞系KBv200系購(gòu)自中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)細(xì)胞庫(kù)。1.1細(xì)胞培養(yǎng):將KB及KBv200細(xì)胞用RPMI1640培養(yǎng)液培養(yǎng)，內(nèi)含10%小牛血清、青霉素100Uml鏈霉素IOOP留ml置37C5%CO:環(huán)境下培養(yǎng)，每日觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況。待細(xì)胞鋪滿整個(gè)培養(yǎng)瓶底面后，進(jìn)行細(xì)胞傳代，耐藥細(xì)胞

4、的培養(yǎng)液中加入lOPgml的VCR維持培養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)前一周撤藥。1.2耐藥譜分析(MTT法):取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的KB及KBv200細(xì)胞，0.25%的EDTA消化、計(jì)數(shù)后，以1X105ml的濃度接種于96孔培養(yǎng)板，每孔20如1，培養(yǎng)24小時(shí)后加入生理鹽水稀釋的不同濃度的各種化療藥物，共同作用24小時(shí)后，每孔加入20川MTT溶液，再培養(yǎng)4小時(shí)后，離心去除培養(yǎng)液，每孔加入二甲基亞諷150川用震蕩器震蕩lOmin后，在全自動(dòng)酶標(biāo)儀上選擇波長(zhǎng)570nm測(cè)

5、定吸光值(A值)，比色時(shí)空白孔調(diào)零，全部實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，取平均值。根據(jù)A值計(jì)算細(xì)胞存活率(VitalrateVR)，計(jì)算公式為:細(xì)胞存活率(%)二用藥組A值對(duì)照組A值X100%。根據(jù)各藥物VR，由藥物濃度的對(duì)數(shù)值與VR線性回歸求出各藥物的半數(shù)抑制率(IC50)。計(jì)算耐藥倍數(shù)(resistantindexRI)，耐藥倍數(shù)=ICso(KBv200)ICso(KB)。1.3Hoechst33258熒光染色法檢測(cè)凋亡率:細(xì)胞與VCR共同作用24小