ICA69通過C末端結構域影響PICK1-PKCα復合物運輸和小腦可塑性.pdf

1、背景:PICK1(protein interacting with C-kinase1)是PKC結合蛋白，是突觸可塑性不可或缺的蛋白。PICK1-PKCα復合物到細胞質膜的轉運是GluR2內吞及其長時程抑制(long-term depression，LTD)的關鍵。ICA69已被證實是PICK1最主要結合蛋白，體內生理情況下，大部分PICK1與ICA69彼此形成異源性復合物。除了BAR結構域，ICA69(islet cell autoa

2、ntigen69 kDa)也包含一個C末端的結構域（ICAC，ICA69蛋白的257-480段氨基酸），在其它蛋白中沒有發(fā)現與ICAC結構域明顯同源的結構域。培養(yǎng)的海馬神經元轉染ICA69可使表達的PICK1從突觸重新分布到樹突。雖然PICK1和ICA69形成異源性BAR結構域被認為可能是相互結合的基礎，然而ICA69的ICAC結構域在PICK1和ICA69復合物中的功能仍然未知，我們的實驗顯示ICAC結構域同樣能強烈結合PICK1，該

3、結構域對PICK1功能或許同樣有重大影響。
　　目的:探尋ICA69或ICAC結構域是否對PICK1-PKCα膜運輸和小腦可塑性產生影響，并進一步探索機制，尋找ICA69和PICK1的結合的影響因素，期望最終能夠回答ICA69如何調控PICK1的功能，以及為以PICK1為靶標的藥物多肽設計提供思路。
　　方法:我們利用Co-IP，蛋白免疫印跡，免疫細胞化學和熒光共振能量轉移技術(FRET)檢測ICAC或其截斷體與PICK1的

4、相互作用;利用激光共聚焦顯微鏡實時觀察活細胞內TPA激活下熒光蛋白的運動;利用電生理技術檢測ICA69及它的不同結構域蛋白對小腦浦肯野細胞的LTD影響。
　　結果:研究顯示，除了BAR結構域，ICAC結構域也能與PICK1強烈的相互作用。磷酸化、去磷酸化及其游離鈣離子濃度影響PICK1和ICA69相互作用。利用LSM實時觀察活細胞內TPA激活下熒光蛋白的運動的實驗中，我們發(fā)現ICA69或ICAC都能與PICK1相互作用而調節(jié)PIC

5、K1-PKCα復合物的膜轉位。ICAC和ΔICAC（包含BAR結構域）在ICA69和PICK1相互結合調節(jié)PICK1-PKCα復合物膜轉位的過程中發(fā)揮不同的作用。ΔICAC易于形成聚集物，而ICAC多在細胞內彌散狀分布。ICA69能抑制PICK1跟隨激活的PKCα膜轉位，ICA69的抑制功能主要由ICAC決定，ICAC結構域也能抑制PICK1跟隨激活的PKCα膜轉位，而ΔICAC不能。電生理實驗中灌注的MBP-ICA69和MBP-ICA