肝癌復發(fā)轉移相關標志蛋白的研究.pdf

1、[目的]
　　原發(fā)性肝癌是惡性程度高、死亡率高的消化系統(tǒng)腫瘤。肝細胞性肝癌占原發(fā)性肝惡性腫瘤90％,轉移和復發(fā)是影響其生存率的主要因素。目前,除AFP外仍沒有一種得到公認可作為臨床常規(guī)檢查的有效的腫瘤標志物。因而,尋找肝癌轉移復發(fā)相關標志蛋白,探討其分子機制已經成為肝癌相關轉化醫(yī)學研究的重點。外周血血漿包含豐富的蛋白質,肝臟局部的組織病理改變也可以表現(xiàn)在血漿蛋白質成分和數(shù)量的改變,此類特征性變化有可能作為實時監(jiān)測指標,對于腫瘤診

2、治有重要意義。本研究采用一個新的研究方法鑒定腫瘤組織釋放到血液中的游離蛋白,以此尋找肝癌的候選腫瘤標志物,并且進行了臨床標本驗證。
　　 [方法]
　　 采用本實驗室前期工作構建的體液中腫瘤相關蛋白研究體系,收集了12例肝細胞性肝癌患者的腫瘤組織和癌旁肝組織樣品,采用上皮細胞專用無血清培養(yǎng)基建立了體外原代培養(yǎng)并收集其條件培養(yǎng)基；其中6例(對)條件培養(yǎng)基所含總蛋白經過透析濃縮除鹽后,以10％聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS—PA

3、GE)分離,隨后進行質譜分析,以此構建肝細胞性肝癌相關游離蛋白數(shù)據庫,對數(shù)據庫中蛋白利用DAVID Bioinformatics Resources(http://david.abcc.ncifcrf.gov/home.jsp)進行了生物信息學分析。結合目前己發(fā)表的肝癌轉移、復發(fā)相關基因表達譜及蛋白標志數(shù)據庫信息,選定候選肝癌復發(fā)轉移蛋白標志。將首選候選肝癌復發(fā)轉移蛋白標志MMP1和MMP7進行回顧性驗證?；仡櫺詮土暩伟┎±?9例,將其

4、中治療后2年后無瘤生存者定義為“極好組”,治療后1年內復發(fā)轉移/2年內死亡者定義為“極差組”；針對極好組(34例)與極差組(35例)患者的腫瘤組織進行免疫組化檢測。同時,通過ELISA的方法,分析候選蛋白MMP1、MMP7以及NID1在126例肝細胞肝癌病例和104例正常人群血漿中的蛋白水平差異。
　　 [結果]
　　 本研究從肝癌和癌旁組織原代培養(yǎng)的6對條件培養(yǎng)基樣品中共鑒定出1365個高可信度蛋白,初步建立了肝細胞肝

5、癌相關游離蛋白數(shù)據庫。其中細胞外(分泌)蛋白占16％,膜蛋白占3％,胞漿蛋白占21％。免疫組化分析結果顯示,MMP1在癌旁肝組織的陽性表達與預后分組、肝被膜浸潤存在顯著性相關；而MMP7蛋白在癌旁肝組織的表達水平顯著性高于癌組織。ELISA結果顯示,MMP1、MMP7和NID1肝癌病人血漿的蛋白水平顯著高于正常人群對照組。NID1與肝被膜浸潤、肝炎肝病背景存在顯著性負相關。MMP7與腫瘤衛(wèi)星灶、腫瘤個數(shù)、肝炎肝病背景存在顯著性正相關。M