庫普弗細胞的藥物、毒物及其它化學物反應相關基因與大鼠肝再生的相關性研究.pdf

1、庫普弗細胞(Kupffer cells，KC)是肝內固有的巨噬細胞，承擔著多種重要功能。在肝再生中，庫普弗細胞的形態(tài)及生理生化活動變化很大，其在肝再生中的作用很值得研究。 為了探尋庫普弗細胞的藥物、毒物及其它化學物反應相關基因與大鼠肝再生的相關性，本研究按Higgins等方法制作大鼠2/3肝切除模型，用門靜脈兩步灌流法分散肝臟細胞，用Percoll梯度離心和免疫磁珠分選法分離庫普弗細胞，用免疫化學方法對其進行鑒定，用蛋白免疫印跡

2、方法檢測庫普弗細胞的標志蛋白溶菌酶(lysozyme，LYZ)和外胚層發(fā)育不良抗原-2(ectodermal dysplasia2，ED2)，用熒光定量PCR測定上述兩者的mRNA含量。結果顯示，分離的庫普弗細胞中，溶菌酶和外胚層發(fā)育不良抗原-2陽性細胞占96％以上：部分肝切除后各恢復時間點庫普弗細胞的上述蛋白含量穩(wěn)定，相應的mRNA含量亦穩(wěn)定。 本研究用搜索網站數據庫和查閱相關學術論文等方法獲得對藥物、毒物及其它化學物的反應基

3、因及其參與的生理生化活動，用大鼠2302.0全基因組表達譜芯片檢測了大鼠部分肝切除(partial hepatectomy，PH)組與手術對照(operation control，OC)組在部分肝切除后恢復0、2、6、12、24、30、36、72、120、168h等10個時點的庫普弗細胞的基因表達情況，用系統生物學方法分析了它們的活動和作用。初步證實，庫普弗細胞在部分肝切除后迅速激活，并合成腫瘤壞死因子、肝細胞生長因子、表皮生長因子、一

4、氧化氮、轉化生長因子等多種細胞因子。除導致自身形態(tài)、功能發(fā)生改變外，還直接影響鄰近的多種細胞，參與肝再生啟動和進展。 研究表明，庫普弗細胞的藥物、毒物及其它化學物反應相關基因中共137個與肝再生相關，涉及細胞代謝、增殖、分化、免疫等多種生理活動：在肝再生啟動(PH后2-6h)、進展(PH后6-72h)和終止(PH后72-168h)等三個階段，起始表達的基因數分別為：69，48和16，總表達的基因數分別為：69，106和83，表明

5、相關基因主要在肝再生啟動階段起始表達，在不同階段發(fā)揮作用，并貫穿于整個肝再生；它們中55％的基因表達增強，45％的基因表達減弱，表明肝再生中庫普弗細胞的多數藥物、毒物及其它化學物反應基因表達增強，少數基因表達降低；它們的上調范圍為對照的3-76.66倍，下調范圍為對照的3-133.46倍，表達模式分為13種，表明肝再生中庫普弗細胞的生理生化活動多樣、復雜。 根據上述基因在肝再生中的表達變化推測，部分肝切除后庫普弗細胞迅速激活，并