寡核苷酸探針原位雜交和原位RT-PCR檢測石蠟切片中PRRSV方法的建立及其應用.pdf

1、據Gen=Bank中有關PRRSV的ORF6和ORF7保守序列，應用Oligo設計軟件設計一套引物，液相PCR擴增出了預期長度為298bp的片段；另外在擴增片段長度范圍內，應用Oligo軟件設計一條長度為37bp的寡核苷酸探針，建立了能特異的從人工感染PRRSV仔豬組織石蠟切片中檢測出PRRSV核酸的原位雜交和間接原位反轉錄PCR方法?！　媒⒌脑浑s交檢測PRRSVSC-1株人工感染不同時間在仔豬體各組織器官的分布規(guī)律，結果表明

2、：感染后3d分別在扁桃體、淋巴結中檢測到PRRSV核酸RNA，感染后5d病毒RNA出現在肺臟、胸腺，感染后7d從腎、腦、腸、脾臟、肝臟中檢測到病毒。肺、腎臟、腦中病毒RNA含量較少；睪丸、附睪偶爾出現陽性信號；子宮、心臟、胰腺在整個實驗過程中均呈陰性反應。　　應用原位雜交檢測各組織，結果表明，淋巴結陽性信號散在于整個淋巴小結。肺臟陽性信號主要分布于肺泡膈間質的巨噬細胞以及血管內皮細胞。扁桃體陽性信號分布于其中的淋巴小結的生發(fā)中心以及間

3、質巨噬細胞。胸腺中PRRS病毒多出現在髓質部，皮質中有少許細胞呈陽性反應。在脾臟中陽性細胞為少許淋巴細胞和巨噬細胞。肝臟陽性部位主要位于肝竇以及少量的肝細胞。腎臟陽性信號位于腎小球及其周圍。腸道陽性信號位于腸集合淋巴結及腸粘膜上皮細胞?！　瞄g接原位RT-PCR檢測扁桃體、脾臟、肺門淋巴結、胸腺，人工感染后1d即可檢測出扁桃體陽性，感染后3d檢測出淋巴結、胸腺、脾臟陽性?！　”狙芯繉⒌脑浑s交方法和間接原位RT-PCR方法檢測