腦出血后腦組織線粒體結(jié)構(gòu)功能及ATPase-6基因表達(dá)變化的研究.pdf

1、該實(shí)驗(yàn)將重點(diǎn)對(duì)腦出血后血腫周圍組織線粒體的結(jié)構(gòu)、功能及直接影響ATP合成的ATPase-6基因表達(dá)進(jìn)行研究,以期為腦出血的臨床治療提供新的理論依據(jù).方法:實(shí)驗(yàn)分四部分:1、模型建立:采用50μl鼠尾血注入尾狀核建立大鼠腦出血模型,分別于造模后12h、24h、3d、1w取血腫周圍腦組織進(jìn)行檢測(cè),處死前進(jìn)行大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分.對(duì)照組進(jìn)針位置相同,但不注血.2、線粒體功能測(cè)定:(1)制備腦線粒體:30s內(nèi)迅速取腦,置入預(yù)冷的分離介質(zhì)中洗滌,

2、選取血腫周圍3mm范圍內(nèi)腦組織,玻璃勻漿器手工勻漿(8上8下)后在0-4℃條件下Ficoll介質(zhì)密度梯度離心法提取腦線粒體;(2)Lowery 法測(cè)定提取線粒體蛋白含量;(3)將每個(gè)線粒體提取液樣本濃度調(diào)整至3mg/ml,Clark氧電極法測(cè)定線粒體呼吸控制率;(4)利用熒光偏振技術(shù)測(cè)線粒體膜流動(dòng)性;(5)比色法測(cè)定線粒體琥珀酸脫氫酶比活性.3、觀察線粒體超微結(jié)構(gòu)變化:取24h、1w出血組的大鼠血腫周圍腦組織固定包埋,超薄切片,透射電鏡

3、觀察.4、線粒體ATPase-6基因表達(dá)測(cè)定:用RT-PCR方法.結(jié)論:1.腦出血早期血腫周圍組織線粒體功能早期下降不明顯,晚期方明顯受損.2.腦出血早期血種周圍組織線粒體超微結(jié)構(gòu)損傷較輕微,晚期受損較嚴(yán)重.3.腦出血早期血腫周圍組織線粒體中參與ATP合成的ATPase-6基因的表達(dá)無明顯下降,晚期則降低明顯.4.腦出血早期線粒體功能、結(jié)構(gòu)保持在一相對(duì)正常范圍,為腦出血的治療提供了一寶貴的"時(shí)間窗";同時(shí),也可能與神經(jīng)細(xì)胞的凋亡機(jī)制有關(guān)