生長分化因子5誘導下自組裝培養(yǎng)形成軟骨組織的實驗研究.pdf

1、目的：探討通過“自組裝”（Self-Assembly）培養(yǎng)技術，以生長分化因子5（GDF-5）誘導人骨髓間充質干細胞（hMSCs)，分化形成軟骨組織的可能性及效果。
　　 方法：將健康成人第3代hMSCs分別用含GDF-5的軟骨誘導液和無GDF-5的軟骨誘導液定向誘導培養(yǎng)。軟骨方向定向誘導3周后重懸細胞，接種于預鋪瓊脂糖的培養(yǎng)板，進行自組裝培養(yǎng)，形成組織團塊。對含GDF-5誘導和無GDF-5誘導培養(yǎng)的自組裝組織團塊經(jīng)行大體觀察；

2、RT-PCR檢測組織團塊Ⅱ型膠原和蛋白多糖mRNA的表達；HE染色觀察自組裝組織細胞結構；免疫組織化學、阿利新藍染色、甲苯胺藍染色檢測誘導細胞Ⅱ型膠原和蛋白多糖表達。對免疫組織化學圖像每個視野下陽性反應物的平均光密度進行測定，并對比兩組進行比較。
　　 結果：通過對hMSCs的自組裝培養(yǎng)，形成了類似軟骨的組織團塊。Ⅱ型膠原和蛋白多糖mRNA表達明顯，免疫組織化學顯示Ⅱ型膠原蛋白表達陽性，阿利新藍染色和甲苯胺藍染色顯示蛋白多糖表達