微流控芯片用于循環(huán)腫瘤細胞高效捕獲的研究.pdf

1、外周血液中的循環(huán)腫瘤細胞，雖然被人們視作腫瘤診斷十分理想的生物標志物，但由于其在血液中的含量極其微?。?毫升血液中往往只存在幾十個甚至幾個循環(huán)腫瘤細胞），使得人們迫切需要開發(fā)出一種高效、可靠以及高通量的循環(huán)腫瘤細胞分離富集平臺。本文以人急性淋巴細胞白血病T淋巴細胞(CCRF-CEM)為目標細胞，人B淋巴細胞瘤細胞(Ramos)為對照細胞，將微流控芯片技術與核酸適配體探針結合起來，實現(xiàn)了對CCRF-CEM細胞的高效捕獲。主要研究內容包括:

2、
　　 1.微流控芯片的構型及其對腫瘤細胞捕獲效率影響的考察。通過實驗發(fā)現(xiàn)，使用氫氟酸對芯片玻璃基片的簡單粗糙化處理，能夠顯著提高目標細胞的捕獲效率。本部分研究解決了微流控芯片構型的選擇以及結構的改進，證實了芯片捕獲腫瘤細胞的可行性，優(yōu)化了氫氟酸對芯片玻璃基片表面粗糙化處理的條件。確定使用10％氫氟酸對玻璃基片表面自然腐蝕60s時為最佳。且在相同的實驗條件下，通過粗糙化處理的芯片對于未處理的芯片，捕獲效率能有10％左右的提高。<

3、br>　　 2.核酸適配體探針的使用方式及其對腫瘤細胞捕獲效率影響的考察。傳統(tǒng)的細胞捕獲技術一般是將捕獲探針固定于芯片通道內，這樣就會由于探針間空間位阻的影響，制約捕獲效率的提高。本部分工作采用游離探針法，即首先將親和素修飾在通道基底表面，接著使用游離的生物素化核酸適配體探針與目標細胞在均相中先行結合，再通入芯片，利用生物素-親和素反應進行捕獲。發(fā)現(xiàn)在相同的實驗條件下，游離探針法的捕獲效率能提高5％左右。并且在此部分對樣品通入芯片的流

4、速、核酸適配體探針的濃度、核酸適配體探針與目標細胞混合孵育時間等條件進行了優(yōu)化，確定在緩沖液中捕獲目標細胞的最佳實驗條件為，流速為3mL/h，核酸適配體探針濃度為1μM，及探針與目標細胞的孵育時間為7 min。在最優(yōu)條件下考察了芯片對于細胞的選擇性，以及不同濃度目標細胞的捕獲效率。
　　 3.人全血樣本中腫瘤細胞捕獲效率的考察。能夠在人全血樣本中實現(xiàn)對于微量腫瘤細胞的捕獲，是本研究的主要目的。但由于人全血樣本與緩沖液有非常大的差