低氧感應、信息傳遞與鉀離子通道在低氧性肺血管收縮中的作用.pdf

1、本研究包括三部分，第一部分大鼠肺動脈平滑肌細胞鉀通道的電生理學特性，利用全細胞膜片鉗技術對大鼠肺動脈平滑肌細胞鉀通道的電生理學特性進行了研究。結果表明在一定的實驗條件下可記錄出鈣激活性鉀電流(Kca)和電壓門控性鉀電流(Kv)。Kca可被四乙胺阻斷，Kv電流由快速失活K+電流(Ka)、緩慢失活鉀電流(Kst)和延遲整流K+電流(KDR)以不同比例整合而成，該電流可被四氨基吡啶所阻斷，據其尾電流得出的電流-電壓曲線呈S形，通過即刻電流可推

2、斷出鉀離子的平衡電位為-72mv。 第二部分CoCl2抑制大鼠肺動脈平滑肌細胞電壓門控性鉀離子通道活性的研究，研究CoCl2對急性分離的大鼠肺動脈平滑肌細胞(PaSMCs)電壓依賴性鉀離子通道(Kv)的影響。方法：采用急性酶分離法分離出大鼠肺動脈平滑肌細胞，然后利用全細胞膜片鉗技術記錄PaSMCs的Kv通道的電流特性；將4-AP加到細胞浴液中，可觀察到Kv電流受到明顯抑制，記錄4-AP作用前后Kv通道的電流變化；再用不同濃度的C

3、oCl2作用于PaSMCs，記錄加藥前后的電流變化。結果：CoCl2對Kv有明顯的抑制作用，并且具有一定的濃度依賴性，在加用Kv的特異性的阻斷劑4-AP后再加用CoCl2不能進一步抑制Kv電流。結論結果表明4-AP和CoCl2均可作用于Kv通道的同一部位。CoCl2可取代血紅素蛋白中央Fe2+,而Co2+與O2的親合力較Fe低，從而抑制了細胞內多種血紅素蛋白的功能，使血紅素蛋白成缺氧構型，模擬了低氧狀態(tài)，低氧的信號傳遞給Kv通道后，使K

4、v電流受抑制，引起平滑肌細胞收縮。上述實驗結果證實PaSMCs的氧感受器為一種血紅素蛋白的結論。 第三部分細胞色素P450氧化酶與低氧感受的關系的研究，探討細胞色素P450氧化酶阻斷劑clotrimazole、miconazole及1-aminobenzotriazole對急性分離的大鼠肺動脈平滑肌細胞(PaSMCs)電壓依賴性鉀離子通道(Kv)的影響。方法：采用急性酶分離法分離出大鼠肺動脈平滑肌細胞，然后利用全細胞膜片鉗技術記

5、錄PaSMCs的Kv通道的電流特性；將4-AP加到細胞浴液中，可見到Kv電流受到明顯抑制，記錄4-AP作用前后Kv通道的電流變化；接著用不同濃度的clotrimazole、miconazole及1-aminobenzotriazole(1-ABT)作用于PaSMCs，記錄加藥前后的電流變化。結果：以上3種藥物對Kv有明顯的抑制作用，具有一定的濃度依賴性，在加用Kv的特異性的阻斷劑4-AP后再加用以上3種藥物不能進一步抑制Kv電流。結論這