htrA、clpP基因對變異鏈球菌生長和耐酸性影響.pdf

1、目的:研究htrA、clpP基因缺失對變異鏈球菌生長及耐酸性影響。
　　方法:利用變異鏈球菌標準株及前期實驗成功構建的htrA單基因缺陷株、clpP單基因缺陷株及htrA-clpP雙基因缺陷株，測定4種菌株在正常培養(yǎng)條件下不同時間段的吸光度，采用MTT試驗測定4種菌株在不同時間段的甲臜吸光度變化情況并探究其與平板活菌計數法所得的活菌量之間關系；將4種菌株培養(yǎng)至對數中期，分成兩組，一組作為實驗組進行5小時預酸化處理(pH=5.5)，

2、一組作為對照組在普通TPY培養(yǎng)液中進行5小時處理，然后將兩組菌株在致死性酸環(huán)境(pH=3.0)處理3小時，每隔1小時取菌液采用平板活菌計數法測定活菌數，計算得到生存率，統計學分析。
　　結果:1.在正常營養(yǎng)條件下，標準株的生長快于htrA、htrA-clpP缺陷株(P<0.05)，除3-4小時外標準株與clpP缺陷株生長無明顯差異(P>0.05)，clpP缺陷株生長快于其他兩種缺陷株(P<0.05)，但htrA缺陷株與htrA-c

3、lpP缺陷株生長無明顯差異(P>0.05)；2.未經預酸化理4種菌株的生存率中，3小時內，標準株、htrA單基因缺陷株和clpP單基因缺陷株的生存率并無明顯差異(P>0.05)，而htrA-clpP雙基因缺陷株變化明顯，差異有統計學意義(P<0.05)，預酸化處理后，與標準株相比，htrA單基因缺陷株、clpP單基因缺陷株及htrA-clpP雙基因缺陷株的生存率都有下降(P<0.05)；3種缺陷株相比生存率差異沒有明顯差異(P>0.05

4、)，預酸化處理的標準株和htrA單基因缺陷株、htrA-clpP雙基因缺陷株生存率均明顯高于未經預酸化處理(P<0.05)，預酸化處理對生存率的影響大于兩種基因缺失(P<0.05)。
　　結論:1.本實驗中htrA、clpP缺失均可抑制變異鏈球菌的生長，并且雙基因缺陷對細菌生長抑制作用與htrA單獨缺失相似，MTT試驗可在一定的菌數范圍內反映標準株與三種缺陷株的活菌數；2.與變異鏈球菌標準株相比，htrA、clpP基因單獨或同時缺