蛋白激酶C—核因子-Kappa B信號傳導通路在妊娠高血壓疾病患者胎盤血管病變機制中作用的研究.pdf

1、目的妊娠高血壓疾病患者胎盤血管內皮細胞損傷后釋放一系列生長因子及細胞因子可促進血管平滑肌細胞增殖及細胞外基質的合成，但其具體的信息通路不明，本文通過檢測妊娠高血壓疾病患者胎盤組織前膠原Ⅰ、ⅢmRNA及蛋白激酶C-核因子-kappaB(PKC-NF-κB)信息分子蛋白的表達以及PKC-NF-κB信號傳導通路對子癇前期患者臍靜脈血清誘導臍動脈平滑肌細胞(HUASMC)增殖及前膠原Ⅰ、ⅢmRNA表達中的影響，旨在探討PKC-NF-κB信號傳導

2、通路在妊娠高血壓疾病患者胎盤血管病變機制中的作用。 資料與方法: 1.標本來源1)收集同濟醫(yī)院婦產(chǎn)科住院病人共51例。其中正常足月妊娠剖宮產(chǎn)孕婦10例；妊娠高血壓疾病剖宮產(chǎn)孕婦41例{其中妊娠期高血壓(GH)10例，子癇前期(PE)輕度11例，子癇前期重度20例}，兩組病例在年齡，孕周上無顯著性差異，所有病例均為單胎妊娠，無肝腎疾病、糖尿病、感染、原發(fā)性高血壓及其他心血管疾病史；2)HUASMC原代培養(yǎng)：收集同濟醫(yī)院婦產(chǎn)

3、科住院病人共100例，其中正常足月妊娠剖宮產(chǎn)孕婦80例；子癇前期剖宮產(chǎn)孕婦20例臍靜脈血各30-50mL制備血清。取正常足月妊娠剖腹產(chǎn)術病人臍動脈平滑肌進行培養(yǎng)(組織塊培養(yǎng)法)，取三至五代細胞進行后續(xù)實驗。 2.研究方法:1.HE染色測定胎盤組織細小動脈管壁面積占血管總面積的百分比(WA/TA)及細小動脈管腔面積占血管總面積的百分比(VA/TA)；2.RT-PCR測定胎盤組織前膠原Ⅰ、ⅢmRNA含量；3.免疫組化、圖像分析等方法

4、測定胎盤絨毛細小血管PKC-α及NF-κBp65的表達及對絨毛血管病變進行綜合評價；4.WesternBlot分析胎盤組織胞膜及胞漿PKC-α、胞漿核因子-kappaB抑制因子(I-κB)及胞核NF-κBp65含量；5.分離與培養(yǎng)臍動脈平滑肌細胞；6.加或不加PKC抑制劑多黏菌素B(PMB)作用30分鐘后分別加入PKC激動劑12-肉蔻酰-13-乙酸佛波酯(PMA)及子癇前期患者臍靜脈血清，培養(yǎng)2h后，WesternBlot測定細胞胞漿I

5、-κB、胞核的NF-κBp65活性；細胞培養(yǎng)48小時后，MTT測定細胞活力，流式細胞學測定細胞周期，RT-PCR測定HUASMC前膠原Ⅰ、ⅢmRNA的表達。 3.統(tǒng)計方法：實驗數(shù)據(jù)以均值±標準差(x±s)表示，采用SPSS軟件進行統(tǒng)計學分析，兩組間數(shù)據(jù)比較采用t檢驗，多組間數(shù)據(jù)比較采用方差分析及q檢驗。P＜0.01表示差異有顯著性。 結果:1.HE染色顯示子癇前期胎盤細小血管管壁增厚、管腔狹窄、管壁纖維素樣壞死、急性粥樣

6、硬化顯著高于對照組(p＜0.01)；2.子癇前期胎盤細小血管(WA/TA)較正常妊娠組及妊娠期高血壓明顯增高，差異有顯著性(p＜0.01)；3.RT-PCR結果顯示子癇前期患者胎盤絨毛組織前膠原ⅠmRNA明顯高于對照組(P＜0.01)；4.免疫組化顯示子癇前期患者胎盤絨毛細小動脈(直徑約100μm～200μm)PKC-α及NF-κBp65顯色強度明顯高于對照組(＜0.01)；5.WesternBlot結果顯示子癇前期患者胎盤組織PKC-

7、α及NF-κBp65均明顯高于對照組，胞漿I-κB明顯低于對照組(＜0.01)；6.盤絨毛細小動脈管壁PKC-α及NF-κBp65的表達與細小動脈中膜平滑肌細胞核密度及胎盤絨毛組織前膠原ⅠmRNA的表達均呈正相關；7.PMA組及子癇前期患者血清組HUASMC的胞漿I-κB表達明顯低于對照組，胞核NF-κBp65表達、細胞活力、前膠原ImRNA的表達、S及G2/M期細胞百分比明顯高于對照組(p＜0.01)，G0+G1期細胞百分比明顯低于妊

8、娠組(p＜0.01)；8.PMB預處理可以抑制PMA及子癇前期患者臍靜脈血清引起的NF-κB核轉位、細胞活力、前膠原ⅠmRNA的表達(p＜0.01)，G0+G1期細胞百分比明顯增加(p＜0.01)。 結論：1.前膠原ⅠmRNA的表達增加在子癇前期患者胎盤血管病變過程中起重要作用。2.子癇前期患者胎盤血管內皮細胞損傷后平滑肌細胞病變過程中存在PKC-α-NF-κB信號傳導通路；3.子癇前期患者臍靜脈血清可激活臍動脈平滑肌細胞PKC