CelL-in-cell胞內嵌和結構形成機制及意義初探.pdf

1、Cell-in-cell是指活細胞進入其他細胞體內的現(xiàn)象，與吞噬作用主動將死細胞或凋亡細胞包裹攝入不同，在cell-in-cell胞內嵌合結構的形成過程中，兩種細胞都表現(xiàn)出一定的作用，并且cell-in-cell胞內嵌合結構形成后，內在的細胞表現(xiàn)出一定的生物活性，雖然大部分最終死亡，但有些能在細胞內存活，進行細胞分裂，甚至能逃逸?？梢詫ell-in-cell簡單地分為兩類，同種細胞之間(homotypiccell-in-cell)和異

2、種細胞間(heterotypic cell-in-cell)。
　　自19世紀末始，就有科學家在組織切片中發(fā)現(xiàn)這種完整細胞進入活細胞的行為，且主要發(fā)現(xiàn)在淋巴細胞與腫瘤細胞間。1925年Lewis用實驗手段觀察到蛙血細胞進入相鄰細胞的現(xiàn)象，1956年Humble等人首先將這一現(xiàn)象定義為Emperipo lesis—“inside round about wandering”，即伸入運動，并提出具有伸入運動傾向的淋巴細胞對癌細胞、巨核

3、細胞及其他高有絲分裂水平的細胞具有顯著的親和力，并推測機體可能借助這些淋巴細胞表達對癌細胞的免疫功能。
　　我們的前期研究發(fā)現(xiàn)淋巴細胞進入腫瘤細胞具有普遍性，多種具有殺傷能力的淋巴細胞均能進入腫瘤細胞中，不同淋巴細胞與腫瘤細胞形成cell-in-cell的比率有差別，而且免疫細胞與腫瘤細胞之間的cell-in-cell現(xiàn)象沒有細胞種系來源的限制性。
　　Cell-in-cell自發(fā)現(xiàn)起便被高度關注，然而由于細胞自發(fā)形成cel

4、l-in-cell胞內嵌和結構的比率較低（大部分在≤10％，除去部分同種細胞鉆瘤外），因此研究的要點是分離高純度cell-in-cell胞內嵌和結構，所以高效、簡易的分離技術也將成為高度關注和引用的熱點。
　　本文主要通過建立人外周血單核淋巴細胞(PBMCs)-人肝癌細胞PLC/PRF/5以及小鼠脾淋巴細胞-PLC/PRF/5兩組淋巴細胞-腫瘤細胞相互作用形成的異種細胞間cell-in-cell胞內嵌和結構的模型，利用流式細胞術檢

5、測cell-in-cell現(xiàn)象發(fā)生幾率，建立一種客觀、高效的檢測技術，并使得分離高純度的cell-in-cell胞內嵌和結構成為可能。并且，研究發(fā)現(xiàn)當淋巴細胞體外活化提高殺傷性淋巴細胞的比例后，cell-in-cell的形成率提高，表明殺傷性細胞更容易形成cell-in-cell胞內嵌和結構。
　　在此技術手段基礎上，我們分別利用小鼠脾淋巴細胞-PLC/PRF/5以及小鼠LAK細胞-PLC/PRF/5的模型，加之流式細胞分選技術的

6、應用，分選出高純度的cell-in-cell胞內嵌和結構（純度＞80％），即分別包含小鼠脾淋巴細胞及小鼠LAK細胞的PLC/PRF/5。進一步通過基因芯片技術尋找到在cell-in-cell的形成和存在過程中靶細胞發(fā)生表達差異，表達上調的基因45個，參與的通路主要有細胞粘附、細胞通訊、信號轉到、脂類代謝、能量代謝等;效應細胞中表達差異的基因1510種，初步探索cell-in-cell形成機制，基因的具體作用還需后續(xù)實驗研究。
　　

7、另外，將分選后的含有cell-in-cell胞內嵌和結構的PLC/PRF/5細胞(P-L，P-S)與未形成cell-in-cell胞內嵌和結構的PLC/PRF/5(PLCsorting)細胞進行平板克隆形成試驗。結果表明:P-L，P-S形成肉眼可見克隆時間較PLC細胞早，培養(yǎng)兩周后形成克隆數明顯增多。細胞克隆形成能力與腫瘤細胞的群體依賴性和增殖能力密切相關，其大小可以反映腫瘤細胞的成瘤能力和惡性程度。表明淋巴細胞進入腫瘤細胞后對腫瘤細胞