小鼠胚胎干細(xì)胞誘導(dǎo)的血管細(xì)胞聯(lián)合種植在PLGA上初步構(gòu)建出血管組織.pdf

1、目的：在我們已有小鼠胚胎干細(xì)胞誘導(dǎo)且經(jīng)過(guò)RT-PCR和免疫組化鑒定血管平滑肌細(xì)胞(VSMc)和內(nèi)皮細(xì)胞(EC)種子細(xì)胞的基礎(chǔ)上，現(xiàn)在探索用誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞和血管平滑肌細(xì)胞，聯(lián)合種植在經(jīng)明膠浸潤(rùn)處理的聚丙交酯/乙交酯(PLGA)靜電紡絲材料上，進(jìn)行體外構(gòu)建小管徑組織工程血管。 方法：①先將PLGA用1％明膠處理，并測(cè)量明膠浸潤(rùn)處理前后PLGA的接觸角。②在明膠處理與否的PLGA片上種植血管平滑肌細(xì)胞，60分鐘后即用甲苯胺藍(lán)染色法觀察

2、材料對(duì)細(xì)胞的親和力：用MTT、掃描電鏡材料觀察經(jīng)培養(yǎng)1天，3天后細(xì)胞在材料上的生長(zhǎng)情況。③在片狀PLGA材料一側(cè)隔日種植血管平滑肌細(xì)胞1次，3天共2次，再于另外一側(cè)種植內(nèi)皮細(xì)胞1次，并進(jìn)行聯(lián)合培養(yǎng)2天后，作H&E和免疫組化檢查。④將聯(lián)合種植了血管平滑肌細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞的PLGA裹成直經(jīng)約1mm管狀包埋于4周齡的裸鼠皮下，分別于3天，1，3周取出進(jìn)行HE染色和免疫組化檢查。⑤同時(shí)用放射免疫法測(cè)定單純種植1次血管平滑肌細(xì)胞的A組，單純種植內(nèi)皮

3、細(xì)胞的B組，聯(lián)合種植了平滑肌和內(nèi)皮細(xì)胞的c組這三組培養(yǎng)液中內(nèi)皮素含量。 結(jié)果：①處理前的接觸角是88.5°，處理后61.5°。②甲苯胺藍(lán)染色見(jiàn)血管平滑肌細(xì)胞在材料上密集、均勻分布：掃描電鏡觀察到1小時(shí)細(xì)胞開(kāi)始延展，1天開(kāi)始長(zhǎng)入孔隙中，3天呈多層分布，無(wú)序狀生長(zhǎng)；MTT檢測(cè)支架上細(xì)胞在3天內(nèi)的增殖情況等同于培養(yǎng)板。③H&E和免疫組化見(jiàn)材料兩側(cè)分別分布著血管平滑肌細(xì)胞和內(nèi)皮。④包埋3周后材料結(jié)構(gòu)仍存在，未被降解吸收。在材料周圍包裹結(jié)