纖維素降解菌青霉DS-04的篩選、產酶條件優(yōu)化及其CMC酶性質研究.pdf

1、從土壤當中篩選到一株生長速度較快、對纖維素降解效果較好的霉菌菌株。根據其形態(tài)學特征及生理生化特性初步鑒定該菌株為青霉屬的常現(xiàn)青霉。在此基礎上對該菌株在不同培養(yǎng)條件下的最佳液體產酶培養(yǎng)基的組成進行了優(yōu)化，對該菌株所產纖維素酶進行了分離純化，對純化得到的單一酶組分的生化性質進行了研究。 實驗結果具體如下：1.利用纖維素雙層平板法從土壤當中篩選到一株對球磨纖維素粉CF-11降解效果較好的菌株。在雙層平板上28℃培養(yǎng)4d有淡綠色菌落出現(xiàn)

2、，三點法觀察10d基本將纖維素粉完全降解，有明顯的透明圈出現(xiàn)。利用劃線法純化以后，接種到查氏培養(yǎng)基上結合插片法觀察菌落的外部特征以及菌絲和孢子等的形態(tài)特征，對照《真菌鑒定手冊》和相關文獻確定該菌株是青霉屬的常現(xiàn)青霉(PenicilliumfrequentansWestlingDS-04)。 2.將青霉DS-04菌株分別接種到5種不同的液體培養(yǎng)基中，通過比較每種培養(yǎng)基中的CMC酶活和濾紙酶活，綜合CMC酶活和濾紙酶活以及產酶時間，

3、確定了最佳初始液體產酶培養(yǎng)基的組成。 以初始產酶培養(yǎng)基為基礎對青霉DS-04菌株進行最佳產酶培養(yǎng)基的優(yōu)化，優(yōu)化因子有：碳源，氮源，培養(yǎng)溫度，初始pH值，接種量和搖床轉數等。結果表明：以1％麩皮和1％纖維素粉為混合碳源，以0.25％NaNO3為氮源；培養(yǎng)溫度為32-34℃；培養(yǎng)基的初始pH值為4.5-5.0；配以0.1％CaCO3無機鹽溶液作為搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)基；接種量為7％；搖床轉數為130r/mi為是最佳培養(yǎng)條件。在此條件下培養(yǎng)7

4、2h可以得到很高的纖維素酶酶活力，CMC酶活力為187.46U/ml，F(xiàn)P酶活力為75.95U/mL。 3.對青霉DS-04菌株的粗酶液進行超濾濃縮，飽和硫酸銨鹽析、透析脫鹽和低溫冷凍干燥得到酶干粉。經SephadexG-100凝膠層析柱分離，得到了CMCase的純酶組分，具有較高的CMC酶活力。將該純酶組分經SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳檢驗純度，結果顯示有單一蛋白譜帶出現(xiàn)，即分離得到了青霉DS-04菌株的CMC酶的單一酶組分。