阿侖膦酸鈉對(duì)破骨細(xì)胞及大鼠各組織中V-ATPASEa3基因影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：建立1x10-8mol/L1,25-(OH)2D3誘導(dǎo)的破骨細(xì)胞體外培養(yǎng)體系和激素性股骨頭壞死大鼠動(dòng)物模型，以阿侖膦酸鈉為干預(yù)手段，觀察阿侖膦酸鈉對(duì)大鼠各組織和破骨細(xì)胞V-ATPAse a3基因mRNA表達(dá)水平及骨吸收功能的的影響。為進(jìn)一步特異性調(diào)控V-ATPase a3基因的研究提供重要理論依據(jù)。
　　方法：
　?、僖?-4周齡 Sprague–Dawley（SD）雄性大鼠的骨髓細(xì)胞，1,25-(OH)2D3作為誘導(dǎo)

2、劑，并與牛薄骨片共同培養(yǎng)，建立大鼠破骨細(xì)胞樣（Osteoclast-like，OCL）體外誘導(dǎo)培養(yǎng)體系。以不同濃度阿侖膦酸鈉進(jìn)行干預(yù)，將細(xì)胞分為：阿侖膦酸鈉高濃度組（A組：10-5 mmol/L）、阿侖膦酸鈉中濃度組（B組：10-7mmol/L）、阿侖膦酸鈉低濃度組（C組：10-9mmol/L），空白對(duì)照組（D組），采用RT-PCR半定量方法檢測(cè)V-ATPase a3基因 mRNA表達(dá)水平的變化，以及分析統(tǒng)計(jì)同期共培養(yǎng)的骨片上骨吸收陷窩

3、的面積，總結(jié)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，檢測(cè)阿侖膦酸鈉對(duì) OC骨吸收的影響。
　?、谝源髣┝考に貫檎T導(dǎo)手段，建立激素性股骨頭壞死大鼠動(dòng)物模型，以不同濃度阿侖膦酸鈉灌胃，32只SD大鼠，體重250±20g，稱重后，隨機(jī)分為：阿侖膦酸鈉高濃度組（1組：10mg/kg）、阿侖膦酸鈉中濃度組（2組：5mg/kg）、阿侖膦酸鈉高濃度組（3組：2.5mg/kg）、模型對(duì)照組（4組），觀察不同濃度阿侖膦酸鈉對(duì)大鼠各臟器組織V-ATPAse a3基因mRNA表達(dá)水

4、平的影響。
　　結(jié)果：
　?、俸涂瞻讓?duì)照組相比，阿侖膦酸鈉顯著抑制破骨細(xì)胞的骨吸收功能和V-ATPase a3基因表達(dá)（P＜0.01），各用藥組之間也有顯著差異（P＜0.01），抑制作用呈濃度依賴性，濃度越高抑制作用越強(qiáng)。
　?、诓煌瑵舛劝鲮⑺徕c對(duì)激素性股骨頭壞死大鼠動(dòng)物模型的骨組織中V-ATPase a3基因表達(dá)有明顯抑制作用（P＜0.01），和濃度呈正相關(guān)，但是用藥前后，其余各臟器組織中V-ATPase a3基因

5、表達(dá)變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　結(jié)論：1×10－8mol/L的1,25-(OH)2D3誘導(dǎo)培養(yǎng)法體外培養(yǎng)的破骨細(xì)胞能夠滿足分子生物學(xué)研究中大量高純度破骨細(xì)胞的要求。V-ATPase a3基因在破骨細(xì)胞正常的骨吸收功能過(guò)程中發(fā)揮重要作用。阿侖膦酸鈉顯著抑制破骨細(xì)胞骨吸收功能；對(duì)破骨細(xì)胞V-ATPase a3基因的表達(dá)有顯著的負(fù)調(diào)控作用，并且呈濃度依賴性。阿侖膦酸鈉對(duì)激素性股骨頭壞死大鼠動(dòng)物模型體骨組織V-ATPase a