重組人血管內皮抑素聯(lián)合順鉑抗血管生成作用的實驗研究.pdf

1、目的：觀察國產重組人血管內皮抑素(恩度)單藥以及恩度與順鉑(CDDP)聯(lián)合時對于原代人臍靜脈內皮細胞(HUVECs)的體外抗管腔形成作用和對雞胚尿囊膜(CAM)的體內抗血管生成作用,并對其機制進行初步探討。 方法：采用MTS/PMS系統(tǒng),測定不同濃度的恩度以及恩度與順鉑聯(lián)合時對HUVECs和人肝癌細胞系HepG2的生長抑制作用；通過流式細胞術,檢測恩度在相同時間內誘導HUVECs和細胞系HepG2早期凋亡和晚期凋亡情況；體外的遷

2、移/侵襲實驗,觀察恩度對HUVECs遷移能力的影響；通過體外管腔形成實驗、鼠動脈環(huán)實驗和雞胚尿囊膜實驗,觀察恩度和順鉑以及二者聯(lián)合對HUVECs體外管腔形成和體內血管的產生及功能的影響。 結果：在50ng/ml～500ng/ml的劑量范圍內,恩度持續(xù)作用72h,對HUVECs具有抑制增殖作用,細胞增殖率在95.3％～70.7％之間,即細胞增殖抑制率為4.7％～29.3％；在50ng/ml～200ng/ml內呈現(xiàn)出典型的濃度依賴關

3、系,且隨著劑量的增大,細胞增殖率逐漸降低,抑制作用逐漸增強；但到達200ng/ml劑量水平后,抑制作用趨于穩(wěn)定。應用臺盼藍拒染法檢測存活細胞顯示恩度對HUVECs未見明顯的細胞毒性。相同條件下,恩度對人肝癌細胞系HepG2未見明顯作用。相同濃度的作用下,經過恩度預處理1h實驗組中HUVECs的晚期凋亡率為16.2％±4.79％,而未預處理組為4.52％±3.20％(p<0.05)。恩度與順鉑聯(lián)合時,在體外對HUVECs的抗增殖、誘導凋亡

4、、抑制管腔的形成具有協(xié)同/增效作用。遷移/侵襲實驗顯示隨著藥物處理方式的不同,恩度對HUVECs遷移/侵襲作用具有顯著差異。恩度和順鉑聯(lián)合時對雞胚尿囊膜的血管產生、面積以及血管的成熟均具有顯著影響(預期值：16.27,平均血管數(shù)；實測值：15.38,平均血管數(shù)),與對照組或各單藥組比較均顯示出協(xié)同作用；而恩度單藥對鼠動脈環(huán)微細血管的產生未見明顯的影響。 結論：新型重組人血管內皮抑素(恩度)能夠抑制原代人臍靜脈內皮細胞(HUVEC