NDRG1基因與乳腺癌生物學行為相關性及其機制研究.pdf

1、乳腺癌的發(fā)病率和死亡率逐年升高，是嚴重威脅女性身心健康的惡性腫瘤之一，而乳腺癌的復發(fā)和轉移是影響其療效的主要因素。因此，迫切需要尋找一個敏感、能早期預測乳腺癌轉移的分子生物學標記物及抑制其轉移復發(fā)的基因治療靶點，為臨床對乳腺癌的復發(fā)和轉移作出早期預測提供一定的參考依據(jù)，從而有助于及時采取更加有效的治療措施。 人NDRGl(N-mycDownstreamRegulatedGene1)是由5組研究人員于近年相繼獨立發(fā)現(xiàn)和分離的與惡性

2、腫瘤轉移密切相關的基因。NDRGl定位于人染色體8q24．2，cDNA全長¨82bp，其編碼的蛋白質分子量為43kDa。有學者在膀胱癌、結腸癌和前列腺癌中對NDRGl與腫瘤細胞的增殖、侵襲和轉移的關系進行了研究，但該基因與腫瘤轉移的相關性究竟如何，尚存在很大爭議。尤其對NDRGl與乳腺癌生物學行為相關性的探討，目前國內、外還沒有系統(tǒng)的研究報道，更未見到有關其抑制癌細胞轉移的分子機制的研究報道。 本課題試圖從臨床人體乳腺癌組織、細

3、胞株和裸鼠乳墊下移植瘤三方面對NDRGl基因表達與乳腺癌生物學行為的相關關系及其作用的分子機制進行研究，以尋找預測乳腺癌轉移的分子生物學標記物及其分子治療的新靶點。 第一部分人體乳腺癌組織和乳腺癌細胞株中NIDRGl表達與腫瘤 轉移的相關關系研究 目的：探討人體乳腺癌組織和乳腺癌細胞株中NDRGl表達與腫瘤轉移的相關關系。 方法：采用免疫組織化學、realtimeRT-PCR檢測人體乳腺癌組織和乳腺癌細胞

4、株中NDRGl蛋白和mRNA的表達。 結果：與無轉移病例的乳腺癌組織相比，在有轉移病例的乳腺癌組織中，NDRGl蛋白和mRNA表達均明顯降低，僅相當于前者的47．7％、20．33％(P

5、相關關系，提示該基因可望成為預測乳腺癌轉移的分子生物學標記物。 第二部分過表達NDRGl對MDA-MB-231細胞增殖、侵襲和轉移潛能的體內、外影響 目的：探討過表達NDRGl對MDA-MB-231細胞增殖、侵襲和轉移潛能的體內、外影響。 方法：重組真核表達質粒pEGFP-NDRGl．N3脂質體法穩(wěn)定轉染MDA-MB-231細胞，用RT-PCR、westernblot、免疫熒光法進行克隆鑒定，篩選出穩(wěn)定過表達ND

6、RGl的細胞株。用BrdU摻入法、流式細胞術檢測NDRGl過表達對MDA-MB-231細胞增殖和細胞周期的影響；細胞體外侵襲實驗和遷移實驗檢測NDRGl過表達后MDA-MB-231細胞侵襲和遷移能力的變化。同時建立裸鼠乳墊下移植瘤模型，觀察NDRGl過表達對移植瘤的生長速度和侵襲轉移的影響。 結果：獲得穩(wěn)定高表達NDRGl的MDA-MB-231細胞克隆pEGFP-NDRGl-N3。體外實驗表明，與未轉染組和轉染pEGFP-N3空

7、載組相比，pEGFP-NDRGl—N3組細胞BrdU摻入率明顯降低，細胞周期Go／Gl期比例增高，S期比例明顯減低。與未轉染組和轉染pEGFP-N3空載組相比，pEGFP-NDRGl一N3組體外侵襲能力降低為前者的72．3％、76．7％(P<0．05)，而體外遷移能力的改變則未見顯著性差異。在裸鼠移植瘤實驗中發(fā)現(xiàn)，pEGFP-NDRGl一N3組裸鼠乳摯下移植瘤生長較pEGFP-N3組明顯緩慢，腫瘤重量明顯減輕，侵襲性明顯下降。

8、結論：NDRGl過表達在體內、外均能抑制人乳腺癌MDA-MB-231細胞增殖、侵襲能力和轉移潛能。 第三部分過表達NDRGI影響MDA-MB-231細胞侵襲和轉移的分子機制的初步探討 目的：初步探討過表達NDRGl影響MDA-MB-23l細胞侵襲和轉移作用的分子機制。 方法：采用realtimeRT-PCR、westernblot檢測NDRGl過表達后MDA-MB-231細胞中MMP-2、MMP-9mRNA和蛋白