Hsa-miR-483-5p靶基因研究.pdf

1、背景和目的:MicroRNAs(miRNAs)是一類小的未編碼的RNAs,參與了基因表達的調控。Hsa-miR-483-5p存在于染色體11p15.5,定位于IGF2基因第二個內含子上。據報道hsa-miR-483-5p的表達含量能夠用于準確地區(qū)分良性和惡性腎上腺皮質腫瘤,并且hsa-miR-483-5p的高表達預示著較低的預后生存率。然而,hsa-miR-483-5p大多數分子靶標至今仍然沒有通過實驗得到證實。我們這個實驗的目的就是為

2、了觀察hsa-miR-483-5p的靶基因和它在人類結直腸癌中對腫瘤發(fā)生所起的作用。
　　方法和結果:為了研究hsa-miR-483-5p的靶基因,我們首先應用生物信息學的方法進行預測。之后,根據高的預測評分,低的能量值,以及與細胞增殖的相關性,DERL1從四個候選靶基因中被選擇進行深入研究。為了進一步觀察hsa-miR-483-5p和DERL1在SW480細胞中的調節(jié)關系,我們分別轉染hsa-miR-483-5p mimics和

3、miRNA negative control入SW480細胞中。使用RT-PCR和Western blot的檢測方法,我們發(fā)現:和陰性對照(NC)組相比,DERL1的相對表達在mRNA和蛋白水平都是被上調的,其中mRNA水平為2.0倍(p=0.0025)上調,而蛋白水平是1.9倍(p=0.0353)上調。在本實驗中我們還研究了hsa-miR-483-5p在細胞增殖方面的效應。MTT細胞增殖實驗的結果顯示:在結腸腺癌細胞系 SW480中,

4、以轉染了hsa-miR-483-5p mimics的細胞為實驗組,以轉染了miRNA Negativecontrol的細胞為陰性對照組,其細胞增值率為59.06％(p=0.0020)。
　　結論:以上數據顯示了DERL1基因是has-miR-483-5p的靶基因。在結腸腺癌細胞SW480中,hsa-miR-483-5p能夠在mRNA水平和蛋白水平上調DERL1的表達。而且,它還可以作為一個癌基因促進細胞生長,參與腫瘤的發(fā)生過程。因