MALDI-TOF-MS聯合磁珠技術對乳腺癌腫瘤標記物的篩選和鑒定.pdf

1、目的：應用基質輔助激光解析電離飛行時間質譜（Matrix-assisted laserdesorption/ionization time-of-flight mass spectrometry，MALDI-TOF-MS）聯合磁珠技術建立乳腺癌診斷模型，發(fā)現乳腺癌特異性腫瘤標志物并鑒定蛋白和驗證。
　　 方法：收集32例乳腺癌患者和59例正常人的血清，高速離心后-80℃冰箱保存。樣本在一個凍融周期內同批進行MALDI-TOF-M

2、S聯合磁珠分析，應用BiomarkerWizard軟件識別蛋白峰信息，用SPSS13.0軟件對數據進行統(tǒng)計學分析，然后應用Biomarker Patterns軟件建立乳腺癌診斷模型并確定目標蛋白。應用磁珠純化蛋白后用Tricine-SDS-PAGE電泳分離蛋白，然后用肽質量指紋圖譜對目標蛋白進行鑒定，最后用免疫沉淀法對已鑒定蛋白進行驗證。
　　 結果：通過軟件分析找到136個符合條件的差異蛋白峰，并用其中的三個，即M11692.

3、4，M15111.4和M15909.8建立了乳腺癌的診斷模型，敏感性達到96.875％，特異性達到98.305％。磁珠純化后的蛋白濃度達到8.33ug/ul，達到電泳上樣量的標準。應用Tricine-SDS-PAGE電泳成功分離目標蛋白，并成功鑒定三個目標蛋白，分別為人血紅蛋白α和β鏈以及人血清淀粉樣蛋白A（SAA），最后用免疫沉淀方法成功驗證了人血紅蛋白α鏈和SAA。
　　 結論：本研究建立的樹形分類模型能夠以高敏感性和特異性