Aif-T18融合蛋白對TEM1陽性細胞的體外殺傷效果評價.pdf

1、背景與目的：
　　惡性腫瘤的發(fā)病率近年來逐漸上升，嚴重威脅人體的生命和健康。雖然對癌癥的治療有手術，放化療以及靶向治療等方法，但都有其固有的局限性。因此，尋找新的穩(wěn)定作用靶位，開發(fā)特異性殺傷腫瘤細胞的新型藥物具有重要的臨床意義。腫瘤內皮細胞標志分子1（TEM1）可在近乎所有實體瘤特別是卵巢癌相關細胞中大量表達，而在正常細胞中不表達或者表達水平很低。因此，TEM1可以作為腫瘤血管治療的標志物。本實驗室在前期研究中利用酵母抗體庫篩選分

2、離出了可同時結合人類和鼠類TEM1的高親和力、特異性單鏈抗體（scFvT18）。本研究中，我們主要利用單鏈抗體scFvT18選擇性攜帶凋亡誘導因子AIF，靶向抑殺TEM1陽性細胞，從而為Aif-T18融合蛋白在腫瘤治療中的開發(fā)應用提供實驗依據。
　　方法：
　　通過基因工程技術構建 pIRES-TEM1-EGFP重組質粒，轉染 TEM1陰性細胞MS1并利用G418篩選出TEM1陽性細胞系（MS1-TEM1）；構建pET302

3、-Aif和pET302-Aif-T18（將scFvT18基因與AIF基因融合）重組質粒，轉化到表達宿主菌BL21中，IPTG誘導得到所需的目的蛋白，之后利用流式細胞技術和MTT檢測融合蛋白對MS1和MS1-TEM1細胞的親和力以及殺傷效果。
　　結果：
　　成功構建了 MS1-TEM1穩(wěn)定細胞系，細胞流式結果顯示：Aif-T18對MS1-TEM1細胞具有較強的結合能力，靶向性良好；MTT結果顯示72 h后， Aif-T18對