三種鱘魚血清免疫球蛋白的比較研究.pdf

1、該文對健康非免疫狀態(tài)下3~4齡中華鱘(A.sinensis Gray,Chinese sturgeon)、2~3齡史氏鱘(A.schrenckii Brandt,Amur sturgeon)和3齡達氏鰉(H.dauricus Georgi,Huso sturgeon)血清蛋白及血清中的免疫球蛋白進行了研究.采用聚丙烯酰胺凝膠電泳的方法分析了這3種鱘魚的血清蛋白.依據哺乳類的血清蛋白分類方法將3種鱘魚的血清蛋白分為白蛋白和球蛋白(包括α、

2、β、γ-球蛋白);3種鱘魚血清蛋白在PAGE電泳膠板上可明顯的區(qū)分為7個主要帶區(qū),中華鱘、史氏鱘和達氏鰉的血清蛋白譜帶分別為7條、11條和8條,血清蛋白的總濃度分別為18.7 mg·ml<'-1>、21.25mg·ml<'-1>和24.6mg·ml<'-1>;3種鱘魚血清蛋白的相似系數表明在生物進化中華鱘與史氏鱘親緣關系比達氏鰉與史氏鱘親緣關系近.采用飽和硫酸氨分步沉淀、sephadex-G200凝膠柱層析的方法純化制備了三種鱘魚的血清

3、免疫球蛋白并對其部分特性進行了分析.實驗結果如下:1.免疫印跡法證實所提純的蛋白為三種鱘魚血清免疫球蛋白IgM,其重鏈也具有抗體活性,而輕鏈的免疫印跡檢測結果為陰性.聚丙烯酰胺凝膠電泳測得的中華鱘、史氏鱘和達氏鰉血清Ig的相對分子量分別為892kDa、867kDa和924kDa.采用降解SDS-PAGE測得三種鱘魚血清Ig重鏈亞基相對分子量都約為88kDa,中華鱘和史氏鱘的Ig輕鏈亞基相對分子量為29kDa;達氏鰉的Ig輕鏈亞基為兩種,

4、相對分子量分別為29kDa和26kDa.2.在37℃,0.05mol·L<'-1>Cys和0.002mol·L<'-1>EDTA-Na<,2>的實驗條件下作用24h,中華鱘、史氏鱘和達氏鰉的血清IgM可被木瓜蛋白酶酶解,經Sephadex G-100分離、純化后獲得了均一性較好的IgFab和IgFc重鏈片段,并經免疫印跡法得到驗證.SDS-PAGE的結果表明,3種鱘魚血清的IgFab和IgFc重鏈的相對分子量相同,分別約為66kDa和4