29949.擬南芥nadph氧化酶(d和f型)與磷脂酸相互作用及其在aba信號轉導中的關系研究

1、南京農業(yè)大學博士學位論文擬南芥NADPH氧化酶（D和F型）與磷脂酸相互作用及其在ABA信號轉導中的關系研究姓名：朱會英申請學位級別：博士專業(yè)：植物學指導教師：章文華200910擬南芥NADPH氧化酶(D和F型)與磷脂酸相互作用及其在ABA信號轉導中的關系研究l，2位脂肪酸為油酸(dil8：1)PA、亞油酸(dil8：2)PA、棕櫚酸和油酸(16：O18：1)PA、棕櫚酸和亞油酸(16：018：2)PA、硬脂酸和亞油酸(18：018：2)

2、PA及天然PA(來自蛋黃)均與蛋白結合。用酶聯(lián)免疫法(ELIsA)進一步證明16：o18：2PA與蛋白特異結合。為了進一步確定PA和A仃bollD(F)結合區(qū)域，我們設計了一系列A仃bolD和AtrbohF的截斷片段，各截斷片段在原核中表達、純化、并進行westem檢測。通過脂肪westem印跡(fatⅥ陀stemblot)和脂微囊結合方法(1iposonlebindingassay)，我們確定了PA一船bohD結合的片段區(qū)域在N端的l

3、oo330氨基酸之間，PAA曲otlF結合的片段區(qū)域在N端的104—341氨基酸之間。進一步的截斷片段表明PA№lD結合區(qū)域在140到160位氨基酸片段。通過點突變實驗，證明AtrbollD的(149，150，156，157)精氨酸是PAA1而011D結合的主要位點我們構建了C端融合HA(Hemaggluti血)標簽的A曲oml60(1160缸)、A劬ohDR(149，150，156，157)A、A仃bollFl71(1171aa)、A

4、仃bollFAL(156，157)RR，并在保衛(wèi)細胞原生質體瞬時表達系統(tǒng)表達了這4個蛋白片段，并用熒光標記的PA進行免疫共沉淀，證實R(149，150，156，157)對AtrbohDl60(1160枷的PA結合是重要的。為了驗證PAAnbohS結合對保衛(wèi)細胞氣孔調節(jié)的生理功能，我們以擬南芥礎婦J、加6D加I和咖6D脅等突變體為實驗材料，研究了在ABA誘導擬南芥氣孔關閉過程中，PLD伐1、PA和A虹bohD(F)的關系。我們使用WT、口

5、護6D而D，a臼6DlF突變體葉片下表皮為材料，進行氣孔開度實驗。通過外源施加ABA、16：o18：2PA和H202，證明PLDal及PA直接調控著AtrbollD和AtrbohF誘導的氣孔關閉過程。用激光共聚焦技術檢測了外源施加ABA和16：0—18：2PA時保衛(wèi)細胞中RoS的積累情況，表明PLDO【l及PA調控著A劬ohD和A曲o”誘導的ROs升高總結，我們發(fā)現(xiàn)磷脂酸PA與№∞PH氧化酶A缸bobD和A1而ohF結合；鑒定了A仃bo