PEG11基因在自然繁殖牛和體細胞核移植牛中印記及DNA甲基化分析.pdf

1、體細胞核移植技術(somatic cell nuclear transfer，SCNT)，又稱體細胞克隆技術，在醫(yī)療、農(nóng)業(yè)及畜牧業(yè)等諸多領域有重要的應用價值。盡管體細胞核移植已經(jīng)在多種哺乳動物中獲得成功，但克隆效率仍然很低，只有2-5％的成活率，即使是存活下來的克隆動物也多伴有器官發(fā)育異常，這些制約了體細胞核移植技術的廣泛應用。在體細胞核移植過程中，體細胞核放棄已有的高度分化的體細胞模式，進行重編程形成全能性的胚胎模式，此過程稱為表觀重

2、編程。目前認為，供體核的不完全重編程導致在發(fā)育過程中有重要作用的基因異常表達或沒有表達是克隆效率低下的主要原因?；蚪M印記是由表觀修飾導致的基因表達具有親本特異性，而DNA甲基化是調控基因組印記的一種主要表觀修飾方式。我們選擇在胚胎和胚盤發(fā)育中有重要作用的DLK1-D1O3印記域的PEG11印記基因進行研究。
　　 通過PCR-SSCP方法在PEG11基因894nt位置找到一個SNP位點(A/G)，用于等位基因特異基因表達和DN

3、A甲基化狀態(tài)分析。結果發(fā)現(xiàn)，在自然繁殖牛的心、肝、脾、肺、腎、肌肉和脂肪7個組織中均表達，并且表現(xiàn)為單等位基因(G)。為了確定基因內(nèi)DNA甲基化是否調控基因的印記表達，應用亞硫酸鹽方法分析了在該基因內(nèi)部的54個CG位點的等位基因特異的甲基化狀態(tài)。結果顯示，兩條親本鏈（A-鏈和G-鏈）均表現(xiàn)為高度甲基化(＞96％)，并且鏈間甲基化水平無顯著差異(P＞0.05)，說明所分析位置的甲基化沒有參與調控PEG11基因。
　　 分析PEG1

4、1基因體細胞核移植牛組織中的表達發(fā)現(xiàn)，PEG11基因在心、肝、脾、腎、肌肉和脂肪6個組織中都是單等位基因表達(G)，但是肺臟中發(fā)生印記紊亂。我們對表現(xiàn)為雙等位基因表達(A/G)的肺臟進行等位基因特異的甲基化狀態(tài)分析，在體細胞核移植牛中也呈現(xiàn)高甲基化狀態(tài)，與自然繁殖牛無顯著差異(P＞0.05)，且兩條鏈間無顯著差異(P＞0.05)，結果進一步證明PEG11基因內(nèi)部的DNA甲基化沒有調控印記基因的表達。盡管DNA甲基化對印記表達沒有調控作用