檢驗乙肝兩對半質量的比較分析——畢業(yè)論文

1、<p><b>　　河南焦作職工醫(yī)學院</b></p><p><b>　　畢業(yè)論文（設計）</b></p><p>　　題目： 檢驗乙肝兩對半質量的比較分析 </p><p>　　姓 名： </p><p>　　學 號：

2、 </p><p>　　專 業(yè)： 臨床醫(yī)學檢驗 </p><p>　　年 級： </p><p>　　層 次： </p><p>　　完成日期： </p&g

3、t;<p>　　指導教師： </p><p>　　檢驗乙肝兩對半質量的比較分析</p><p>　　【摘要】 目的: 探討與分析臨床檢驗乙肝兩對半的檢驗質量影響因素性。 方法： 整理本醫(yī)院在實際研究當中對乙肝兩對半的檢驗質量影響因素的各種因素，同時對其實施相應綜合措施進行探討。 結果: 根據討論中所得的原因對其進行有效的控制，避免

4、出現假陽性和假陰性結果,保證檢驗質量,為臨床提供正確可靠的檢測結果。 結論: 全面、細致以及周到的具有綜合性的措施能夠在最大程度上使對標本質量產生的影響有所減少，對影響因素進行有效的控制，使檢驗標本質量得到了一定程度上的提高 </p><p>　　【關鍵詞】 乙型肝炎；血清標志物；檢驗質量 </p><p>　　酶聯免疫吸附測定法（enzyme-linked immunosorbent

5、assay,ELISA)廣泛用于乙肝兩對半檢測。但ELISA測定中影響因素較多,有時可見到一些假陽性或假陰性,本文就ELISA測定乙肝兩對半的影響因素做討論。對ELISA與時間分辨熒光免疫分析（time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA)檢測方法進行比較,就包括試劑、標本、操作、干擾因素的影響進行分析。乙肝兩對半的檢驗質量影響因素還包括使用儀器設備的功能以及檢修、藥物的影響等,一般檢測時應從多方面排除干擾

6、因素,避免出現假陽性和假陰性結果,保證檢驗質量,為臨床提供正確可靠的檢測結果。 </p><p>　　1乙肝兩對半定性與定量方法 </p><p>　　1.1酶聯免疫吸附試驗（ELISA） </p><p>　　酶聯免疫吸附法(ELISA法)是為乙肝患者進行臨床檢測時常用的方法，因本身方法學的局限性，易造成HBV漏診。ELISA是一種酶標記固相免疫測定技術。其基

7、本原理是把抗原或抗體結合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性；并將抗原或抗體與某種酶連接成酶標記抗原或抗體，它既保留了免疫活性，又保留了酶的活性；測定是將受檢樣品（含待測抗原或抗體）和酶標記抗原和抗體按一定程度與結合在固相載體上的抗原或抗體反應形成抗原抗體復合物；用洗滌的方法將固相載體上形成的抗原抗體復合物與其他物質分開，結合在固相載體上的酶量與標本中受檢物質的量成一定的比例；加入底物，底物被固相載體上的酶催化變成有色產物，通過定性或定

8、量檢測有色產物量即可確定樣品中待檢物質含量，所以ELISA法是目前我國各級醫(yī)院的檢驗科用來預防、診斷、篩查乙肝的主要技術手段。 </p><p>　　1.2 時間分辨熒光免疫分析技術（TRFIA） </p><p>　　時間分辨熒光免疫分析法師在熒光分析（FIA）的基礎上發(fā)展起來的一種特殊的熒光分析法。也是目前最靈敏的微量分析技術，其靈敏度高達10∧(-12)g/ml，較放射免疫分析(RI

9、A)高出3個數量級。它利用了具有獨特熒光特性的鑭系及其螯合物為示蹤物，通過標記多肽、蛋白質、抗體、激素、核酸探針、生物活性細胞，反應體系發(fā)生相關反應之后，采用時間分辨熒光免疫分析儀來測定最終產物中的熒光強度，再根據熒光強度與相對熒光強度的比值，可判斷反應體系中的被測物濃度，以此完成定量分析。實際上是在熒光分析的基礎上發(fā)展起來的，它是一種特別的熒光分析，它利用了熒光的波長其激發(fā)波長的巨大差異客服了普通紫外-可見分光分析法中雜色光的同時，時

10、間分辨熒光免疫（TRF）分析法之所以能夠成為一種更新，更靈敏的檢測方法，主要取決于標記稀土離子的獨特的熒光光譜特性，激發(fā)譜寬，STOKES位移大，熒光壽命長，通過采用高靈敏的時間分辨熒光分辨技術經延時，門寬選擇，排除背景熒光的干擾，極大地提高信嗓比。此項分析技術具有靈敏度高，穩(wěn)定性好，線性范圍寬，標記物制備簡便，有效期長，不污染環(huán)境，操作簡單，應用范圍廣等優(yōu)點，是取代酶標放免的最佳免疫</p><p>　　2 E

11、LISA 與TRFIA檢測方法的比較 </p><p>　　對乙肝兩對半的定量測定(TRFIA)和定性酶標測定(ELISA)的研究表明，兩種方法對HBs－Ag,HBs-Ab,HBe-Ag,HBc-Ab的陽性檢出率差異不明顯，無統計學意義(P＞0.05)；TRFIA法的HBe-Ab的陽性率差異高于ELISA法，有統計學意義(P＜0.05)；兩者均可滿足對乙肝兩對半5項指標的檢測要求。ELISA用于預防性篩查乙肝，可

12、定性檢測HBV，而TRFIA技術靈敏度高、穩(wěn)定性好、特異性高、動態(tài)范圍寬，用于乙肝患者臨床診斷、觀察療效等方面，可提供動態(tài)數據指導臨床接種乙肝疫苗，是理想的定量檢測方法?！耙腋蝺蓪Π搿钡臋z測結果意義在于反映機體感染HBV后免疫應答結果。 </p><p>　　3樣本采集與處理的影響 </p><p>　　3.1標本的采集處理可對ELISA的檢驗質量產生不同程度的影響 </p&g

13、t;<p>　　標本及混有紅細胞的血清易沉淀或附著在聚乙烯孔內不易洗凈，殘留在孔內的血紅蛋白具有過氧化物酶樣的活性，催化底物顯色造成假陽性，（因此）嚴重溶血標本禁用。 </p><p>　　3. 2相關報道顯示樣品的存放時間直接影響結果的準確性，室溫下保存的血清標本</p><p>　　HBsAb從第5天、HBeAg從第7天、HBsAg從第9天開始就發(fā)生顯著變化）（p<

14、;0.01）；4～8℃下保存的血清標本HBsAb從第7天、HBsAg從第14天開始發(fā)生顯著變化（p<0.01），于-80℃低溫保存的血清樣本HBV血清標記物可在4個月內穩(wěn)定保存（p>0.05）；采集的樣品應及時進行檢測，可避免因存放過久的檢驗誤差。 </p><p>　　3.3標本凝固不全，正常血液采集后1／2~2h開始凝固，18~24ｈ完全血塊完全收縮</p><p>　　

15、在工作中，有時為了爭取時間快速檢測，常在血液還未開始凝固時即強行離心分離血清，使血清中仍殘留部分纖維蛋白原，在ELISA測定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白血塊或附著在酶標板孔壁內使酶標記物不易洗掉，易造成假陽（陰）性結果；因此血液標本采集后必須使其充分凝固后再分離血清，或標本采集時用帶分離膠的采血管或于采血管中加入適當的促凝劑。 </p><p>　　3.4乙肝兩對半定量檢測能提供乙肝病毒標志物的精確含量&l

16、t;/p><p>　　這不僅是方法學上的進步，在臨床的使用上也有較大優(yōu)越性。臨床應用情況表明，乙肝兩對半定量檢測值的高低是診斷乙肝的可靠依據。資料顯示，血清乙肝病毒血癥水平的增加觸發(fā)了機體免疫反應，結果導致肝臟損害，表現為轉氨酶（ALT）升高。檢測乙肝病毒含量不僅能較好地反應乙肝病毒攜帶者的病毒血清水平和感染強弱程度，對動態(tài)觀察治療前后乙肝病毒含量變化以及評價和預測療效均有重要意義。因此，乙肝兩對半定量檢測的變化對評

17、價和預測療效均有意義，是療效觀察的有效指標。如伴隨著HBs-Ag的濃度和HBc-Ag濃度的降低，說明病情好轉，治療有效，特別是HBc-Ag濃度的減少直至消失，是治療效果的最佳體現。乙肝兩對半定量檢測較定性檢測更敏感，在乙肝病毒標志物處于低濃度時，定性檢測可表現為陰性，而定量檢測仍可檢出，寫在一定程度上減少了漏診率，避免誤診，充分 體現了乙肝兩對半定量測定的優(yōu)越性。相對于乙肝兩對半定性檢測而言，乙肝兩對半定量檢測能提供乙肝病毒標志物的含量

18、，對治療的轉歸判斷有更精細的指導意義，在臨床的使用上也有較大優(yōu)越性，乙肝兩對半定量是治療觀察的有效指標，為醫(yī)生確定及調整診效方案提供了科學有效的臨床依據。</p><p>　　4操作因素的影響 </p><p>　　乙肝兩對半ELISA檢驗過程包括加樣、加試劑、孵育、洗板、酶標儀、報結果等，每一步驟都有可能人為造成檢驗結果偏差，故對檢驗人員的操作技術要求極高。與ELISA相比較，TRFI

19、A法的操作可避免人為因素造成的檢驗干擾，隨著TRFIA儀器及試劑國產化、檢驗費用的降低，將利于TRFIA法的臨床推廣。 </p><p>　　5干擾物質的影響 </p><p>　　大約40%的人血清標本中含有非特異性干擾物質，可以不同程度影響檢測結果；常見的干擾物質：有類風濕因子、嗜異性抗體、醫(yī)源性誘導的抗鼠Ig（s）抗體、嗜靶抗原自身抗體等。干擾物質可能造成檢測結果假陽性或假陰性，

20、TRFIA法利用時間分辨熒光分析儀在激發(fā)后延遲測量時間，可有避免非特避免非特異性熒光的干擾，以此提高檢驗的特異性。 </p><p>　　乙肝兩對半的檢驗質量影響因素還有許多方面，包括儀器設備的功能及檢修，藥物的影響等，實際檢測乙肝兩對半時，應從多方面排除干擾因素，避免出現假陽性和假陰性結果，保證檢驗質量，為臨床提供正確可靠地檢測結果。 </p><p><b>　　6.試劑

21、的影響 </b></p><p>　　試劑盒影響及處理方法 在ELISA法實驗當中，試劑盒質量是實驗結果正確性的基本保證，因各商家的試劑盒特異性、靈敏性、穩(wěn)定性與精密性等存在一定差異，因此，為了避免試劑盒所帶來的影響，實驗所用的試劑盒應均是國家相關部門檢定的合格品，不同廠家生產試劑地特異性和靈敏度地范圍為89.4%~99.3%、78%~89%[3]，數據顯示存在很大的差異。對于商家試劑盒存在的差異性

22、，各實驗室可依據自身實際狀況，盡量選擇靈敏性好、特異性強與操作簡單的試劑盒，并符合相關部門的質量要求，同時，試劑盒要保存在2℃-8℃的環(huán)境中，并做好溫度記錄，當試驗時，應把試劑盒放在室溫中，對其平衡0.5h，確保反應時間的一致性與準確性。 </p><p>　　結論：全面、細致以及周到的具有綜合性的措施能夠在最大程度上使對標本質量產生的影響有所減少，對影響因素進行有效的控制，使檢驗標本質量得到了一定程度上的提高

23、</p><p><b>　　參考文獻</b></p><p>　　[1]任建新.時間分辯熒光免疫法定量檢測乙肝兩對半的效果評價（J）.中外醫(yī)療，2010（13）：78。</p><p>　　[2]梁升林、羅凱、廖桂梅，等乙方肝兩對半檢測結果分析評價（J）.中國社區(qū)醫(yī)師，2010（12）：124-125。</p><p>

24、;　　[3]趙遠懷、向際兵、羅樂平等乙肝兩對半檢測的臨床意義。</p><p>　　[4]尹永貞.1028例乙肝兩對半的檢測結果分析評價（J）.當代醫(yī)學，2011.17（15）：73--74。</p><p>　　[5]賀云方.定性酶標測定與定量檢測對肝兩對半結果的影響評價（J）.醫(yī)學信息：中旬，2011.24（6）：56-57。</p><p>　　河南焦作職工醫(yī)