ATPase域調節(jié)結核分枝桿菌螺旋酶GyrB與GyrA的相互作用.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、DNA螺旋酶是一種類型Ⅱ的拓撲異構酶，它是唯一的能夠能夠向DNA鏈中引入負超螺旋的拓撲異構酶，這一過程是需要ATP水解的能量。螺旋酶存在于細菌體內，但是人體內不含有此種酶，所以成了很多藥物的靶標，比如臨床上應用比較廣泛的喹諾酮藥物。
　　 但是關于GyrA和GyrB之間的具體的作用區(qū)域或者是位點還沒有人進行研究，本人所在的課題組借助前人的關于螺旋酶的作用的模型已經把相互作用的范圍縮小在GyrB的Toprim結構域。我們本課題就是

2、基于這個基礎提出的，我們通過對GyrB的ATPase域進行逐步的截短，然后通過酵母雙雜交技術進行驗證階截短的GyrB能夠和GyrA發(fā)生相互作用，并利用X-gal顯色的方法證明兩者之間的結合能力的大小，并進行兩者之間的親和力和結合常數(shù)的大小，并通過一定的手段來測定截短的GyrB以及重組酶相對于野生型的構象的變化。
　　 本課題的目的是想得出GyrB的ATPase結構域在GyrA和GyrB之間的相互作用中起的作用以及這個結構域是通過

3、何種方式來影響兩者之間的相互作用的。能夠為治療結核病的藥物的開發(fā)提供一定的理論基礎。
　　 本課題的主要研究結果為：
　　 1、依據gyrB基因序列，擴增突變體片段gyrB79-714、gyrB183-714、gyrB△79-182、gyrB△294-465；將擴增的片段分別與表達載體pET28a和酵母載體pGADT7相構建；并進行蛋白純化。
　　 2、酵母雙雜交、SPR等實驗結果證明：ATPase、Transd

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