枸杞多糖對(duì)己烯雌酚致成年雄性倉(cāng)鼠生精損害的緩解作用及機(jī)理研究.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)旨在研究己烯雌酚（Diethylstilbestrol，DES）對(duì)成年雄性倉(cāng)鼠生殖損傷的作用機(jī)制及枸杞多糖（Lyciumbar barum polysaccharide，LBP）的緩解作用。將66只成年雄性倉(cāng)鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組(A)，DES組(B)，1 mg/kg、10mg/kg及50 mg/kg LBP組(C，D，E)及VC+VE組(F)(n=11)。除對(duì)照組外，其余5組均皮下注射己烯雌酚，對(duì)照組注射等劑量的橄欖油，連續(xù)用藥7

2、d，同時(shí)C、D、E組分別灌胃1、10、50 mg/kg的LBP，F(xiàn)組灌服100 mg/kg的VC及200 IU/kg的VE，A、B組灌服等劑量的生理鹽水。于末次給藥24 h后，乙醚麻醉倉(cāng)鼠，心臟采血，分離血清，分別用于氧化指標(biāo)SOD、GSH-Px、MDA及激素T、LH、FSH的檢測(cè);分別摘取兩側(cè)睪丸、附睪、精囊腺，迅速去除周圍脂肪及結(jié)締組織稱量并計(jì)算臟器指數(shù);于波恩氏液固定睪丸制成切片觀察組織學(xué)變化，并進(jìn)行免疫組化Bax、Fas、Fas

3、L及Caspase-3的檢測(cè);取睪丸迅速保存于液氮中進(jìn)行RT-PCR及Western-blot檢測(cè)，確定Bcl-2、Bax、Fas、FasL及Caspase-3的表達(dá)。
　　結(jié)果顯示DES顯著降低倉(cāng)鼠體重、器官重量及器官指數(shù)，而10/50 mg/kg LBP及維生素對(duì)其有顯著緩解作用(P＜0.05);DES處理組倉(cāng)鼠睪丸組織結(jié)構(gòu)嚴(yán)重?fù)p傷，LBP作用后其損傷顯著減輕，其中以10/50 mg/kg LBP的作用最為明顯，VC+VE也對(duì)

4、其有的緩解作用，且50 mg/kg LBP組與VC+VE組無(wú)顯著差異。通過(guò)免疫組織化學(xué)、RT-PCR及Western-blot的方法檢測(cè)睪丸組織Bcl-2、Bax、Fas、FasL及Caspase-3的表達(dá)，結(jié)果顯示DES顯著降低Bcl-2的表達(dá)(P＜0.01)，提高Bax、Fas、FasL及Caspase-3的表達(dá)（P＜0.05）;給予不同劑量的LBP后，Bcl-2的表達(dá)呈劑量依賴性增加，以50 mg/kg LBP增加最為顯著(P＜0

5、.01)，Bax、Fas、FasL及Caspase-3的表達(dá)呈LBP劑量依賴性降低，以50 mg/kg LBP組表達(dá)最低(P＜0.01);與VC+VE組相比，50 mg/kg LBP對(duì)凋亡蛋白的調(diào)節(jié)作用差異不顯著;在抗氧化指標(biāo)檢測(cè)中，DES顯著性降低血清SOD、GSH-Px水平(P＜0.01)，增加MDA水平(P＜0.01);補(bǔ)充不同劑量的LBP后，血清SOD、GSH-Px水平增加(P＜0.01)，而MDA水平下降(P＜0.01)，VC

6、+VE組對(duì)機(jī)內(nèi)抗氧化指標(biāo)的作用要優(yōu)于LBP組;對(duì)血清生殖激素的檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，血清FSH、LH和T的水平在DES作用下降低（P＜0.01）;而LBP對(duì)血清中激素的水平有不同程度的提高，其中以50 mg/kg作用最顯著(P＜0.01)。
　　結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)證實(shí)，DES通過(guò)降低機(jī)體抗氧化酶活性，擾亂生殖內(nèi)分泌系統(tǒng)，激活體內(nèi)的生殖凋亡途徑導(dǎo)致成年雄性倉(cāng)鼠生殖損傷;補(bǔ)充不同劑量的LBP后，LBP降低睪丸組織的脂質(zhì)過(guò)氧化水平，升高抗氧化酶活性;提高