染料木素對卵清蛋白誘導過敏性腹瀉小鼠腸道微生物區(qū)系的影響.pdf

1、近年來，食物過敏呈現上升趨勢。食物過敏與腸道微生物的紊亂有關，但是食物過敏導致哪些微生物變化？微生物在食物過敏中起到什么作用？目前相關報道并不多見。由于斷絕食物過敏原比較困難，益生元以作為一種新型療法引入到食物過敏的預防和治療。染料木素作為一種植物雌激素對人類有多種益處。為闡明食物過敏性腹瀉與微生物之間的關系，染料木素是否能改善食物過敏性腹瀉，以及染料木素改善食物過敏腹瀉的微生物學機制。本研究采用PCR/DGGE和real-time P

2、CR分子技術，從糞樣、結腸內容物和結腸粘膜三部分研究染料木素對卵清蛋白誘導腹瀉小鼠微生物區(qū)系的影響。
　　 一染料木素對卵清蛋白誘導雌性BALB/c小鼠過敏性腹瀉的影響
　　 試驗采用32只清潔級雌性BALB/c小鼠隨機分為陰性對照組(N)、陽性對照組(P)、低劑量染料木素組(L)和高劑量染料木素組(H)四組，每組8只小鼠，N組和P組飼喂無豆日糧，L紐和H組飼喂在無豆日糧基礎上分別添加10mg/kg和100mg/kg染料

3、木素的日糧，經過腹腔注射致敏和OVA灌胃攻毒，成功建立了過敏性腹瀉模型。小鼠在2、15和33天平均采食量明顯下降，經過校正，低劑量染料木素組實際攝入量（mg/kg BW）為1.22，高劑量染料木素組實際攝入量為12.19。小鼠在32天開始出現腹瀉，從32天到38天各組腹瀉小鼠數量開始增加，并且小鼠平均體重有下降趨勢。小鼠38天腹瀉情況為:N組沒有出現腹瀉，P組和H組腹瀉嚴重，L組腹瀉減輕。
　　 二染料木素對卵清蛋白誘導過敏性腹

4、瀉小鼠糞樣微生物區(qū)系的影響
　　 本實驗選取不同天數小鼠糞樣，利用PCR/DGGE技術研究了染料木素對OVA誘導腹瀉小鼠糞樣微生物區(qū)系的影響。DGGE分析顯示:28天小鼠糞樣微生物各個組別沒有差異;38天低染料木素組出現一條特異性條帶;稀糞樣微生物區(qū)系多樣性明顯降低，H組特異條帶與梭菌屬相似性高，可能和H組腹瀉有關;全程DGGE圖譜顯示:同組中不同天數小鼠糞樣微生物區(qū)系相似，稀糞樣微生物區(qū)系多樣性明顯降低，高染料木素組條帶6出現

5、，條帶7消失。結果顯示:致敏對小鼠糞樣微生物區(qū)系沒有影響;稀糞樣微生物多樣性顯著降低;染料木素可以誘導某些菌群的富集，可能與腹瀉相關。
　　 三染料木素對卵清蛋白誘導過敏性腹瀉小鼠結腸內容物微生物菌群的影響
　　 本實驗研究染料木素對第38天OVA誘導腹瀉小鼠結腸微生物菌群的影響，DGGE和Real-time PCR分析結腸內容物細菌菌群。DGGE分析顯示:與N組相比，P組多樣性顯著降低，同組（P組和L組）內，正常和腹瀉

6、小鼠樣品間稍有差異，但是其相似性高于組間相似性。定量結果表明:相比于N組，P組、L組和H組總菌的拷貝數增加，雙歧桿菌的拷貝數顯著降低，梭菌Ⅳ群和大腸桿菌的拷貝數沒有發(fā)生顯著變化;相比于N組和L組，P組乳酸桿菌拷貝數顯著下降，H組下降但不顯著;相比于L組，H組擬桿菌拷貝數顯著增加。結論:腹瀉小鼠結腸菌群多樣性降低，乳酸桿菌和雙歧桿菌拷貝數降低;OVA致敏誘導使小鼠總菌拷貝數增加，雙歧桿菌減少;低染料木素組可減輕腹瀉，相比于腹瀉組別小鼠（P

7、組和H組），乳酸桿菌拷貝數增加，染料木素緩解腹瀉的作用可能與其增加乳酸桿菌的拷貝數有關。
　　 四染料木素對卵清蛋白誘導過敏性腹瀉小鼠結腸粘膜微生物菌群的影響
　　 本實驗研究染料木素對第38天OVA誘導腹瀉小鼠結腸粘膜微生物菌群的影響，以DGGE和Real-time PCR技術分析結腸粘膜細菌菌群。DGGE分析顯示:組別之間出現條帶差異，相似性分析不同組別分布在不同的簇。定量結果表明:各組別間總菌的拷貝數和擬桿菌的拷貝

8、數差異不顯著，但是相對于N組，P組、L組和H紐擬桿菌占總菌比例都增加，P組有增高趨勢，H組增加極顯著;相對于N組，L組的乳酸桿菌拷貝數顯著增高，P組拷貝數有升高趨勢;相對于N組和L組，P組和H組大腸桿菌的拷貝數降低，P組和L組差異顯著。結論:相比于N組和L組，腹瀉小鼠（P組和H組）擬桿菌占總菌的比例增加，大腸桿菌拷貝數減少;OVA致敏誘導使小鼠結腸粘膜乳酸桿菌的拷貝數增加。低染料木素組可減輕腹瀉，相比于N組，低染料木素組(L)粘膜乳酸桿