利用誘導子處理與啟動子轉化雙向策略提高丹參毛狀根中丹參酮含量的研究與探索.pdf

1、丹參(Salvia miltiorrhiza Bunge)，作為傳統中藥在治療心腦血管等疾病中已得到廣泛的應用與開發(fā)；另外，作為新一代中草藥中的模式植物，丹參基因組測序包括基因功能等研究也正如火如荼地展開。野生丹參資源的日益匱乏，品質的逐步退化，加上市場對丹參原材料的需求不斷提高，如何利用科學技術手段解決此類問題成了目前研究的重中之重。
　　 本實驗具體做了兩部分的工作：
　　 其一，選取丹參酮含量最高的丹參轉基因毛狀根

2、株系G50(3.55 mg/g)為材料，利用甲基茉莉酸(MJ)、水楊酸(SA)作為誘導子對其進行誘導處理，結果表明丹參轉基因毛狀根G50在經過MJ誘導處理36h后效果最為明顯，丹參酮含量提高了3.19倍(11.33 mg/g)。
　　 其二，選取擬南芥AT5G46900、AT1G22440基因啟動子作為前期研究對象，將啟動子序列構建于植物表達載體pCAMBIA1301上，進而分別轉化擬南芥(農桿菌GV3101介導)與丹參毛狀根(

3、發(fā)根農桿菌C58C1介導)，基因芯片數據預測這2個基因都在擬南芥根部特異表達，半定量實驗結果符合芯片預測，另外，根據GUS染色結果，GUS蛋白在擬南芥與丹參毛狀根中都有表達。
　　 本研究首次在丹參轉基因毛狀根株系中添加誘導子處理，并發(fā)現甲基茉莉酸的誘導效果最為顯著，在提高丹參毛狀根中丹參酮含量的研究上又向前推進了一步；另外，成功地克隆了擬南芥AT5G46900、AT1G22440基因的啟動子，并在擬南芥與丹參毛狀根中都能啟動表