冷脅迫下東農冬麥1號7種轉錄因子的表達模式與TaOBF1的結合特異性分析.pdf

1、低溫、干旱和鹽等非生物脅迫對植物的生長和發(fā)育有著巨大影響，低溫脅迫是影響植物生長和分布的主要影響因素之一。近年來的研究顯示基因的表達調控，特別是轉錄因子在植物響應冷脅迫過程中起到重要作用。冬小麥“東農冬麥1號”是東北農業(yè)大學培育的抗凍冬小麥品種，據(jù)田間觀測數(shù)據(jù)表明，該品種可以抗-30℃低溫凍害。
　　 本研究通過對小麥中已知的bZIP等6個家族的7種轉錄因子在冬小麥東農冬麥1號受極低溫度脅迫(-25℃)條件下的表達情況分析，以期

2、尋找冬小麥東農冬麥1號中與冷脅迫有關的轉錄因子，并對其調控的機制進行研究。TaOBF1轉錄因子是小麥中的OBF1型轉錄因子，而TaOBF1和DNA的結合特異性的研究未見報道，因此本研究通過凝膠阻滯試驗證明TaOBF1轉錄因子是否也與G-box具有結合特異性，從而揭示TaOBF1轉錄因子的調控基因表達的規(guī)律，也為冷脅迫下冬小麥基因的表達調控機理研究提供了參考。實驗結果顯示：⑴實時熒光定量PCR表明，在東農冬麥1號中隨著溫度的降低，轉錄因子

3、TaOBF1、MYB3和HvWRKY6轉錄因子基因的表達均呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢，且變化幅度大于較濟麥22。說明上述3種轉錄因子與冬小麥響應冷脅迫具有相關性。而轉錄因子DRFL2、FLbaf113d20、HvWRKY6和NAC69-1基因的表達的規(guī)律性較不太顯著，說明這4種轉錄因子與冬小麥響應冷脅迫的關系不明確。⑵克隆了全長的TaOBF1轉錄因子基因，通過構建pET-32b-TaOBF1原核表達載體和優(yōu)化表達條件獲得的融合蛋白，并通過進