蓖麻毒素的提取、純化以及293a細胞在其毒性作用下的蛋白質(zhì)組學初步分析.pdf

1、以大規(guī)模分析蛋白質(zhì)作為主要研究內(nèi)容的蛋白質(zhì)組學是功能基因組研究的主要內(nèi)容之一，蛋白質(zhì)組學分析技術(shù)取得的重大進步使細胞內(nèi)全蛋白的組成及其活動規(guī)律的研究成為熱點。本實驗以蓖麻籽為實驗材料，采用硫酸銨沉淀法提取了蓖麻毒素粗毒，利用親和層析與凝膠過濾層析純化了蓖麻籽中的蓖麻毒素，并從細胞水平研究了蓖麻毒素的毒性作用以及純化后的蓖麻毒素與標準品在毒性方面的差異。同時應用二維凝膠電泳、肽質(zhì)量指紋質(zhì)譜測定、蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫比對等蛋白質(zhì)組學技術(shù)研究了純化后

2、的蓖麻毒素的毒性作用對293a細胞蛋白質(zhì)組的影響，并對誘導蛋白的類型及其所對應的功能進行了分析。取得了以下研究結(jié)果：
　　 采用硫酸銨沉淀法提取了蓖麻毒素的粗毒，應用Sepharose4B柱親和層析和Sephacryl S-200柱凝膠過濾層析對蓖麻毒素進行了純化，SDS-PAGE鑒定表明純化后的蓖麻毒素達到了電泳純。
　　 用毒素標準品和自制毒素對293a細胞進行毒性實驗，將毒素標準品和自制毒素稀釋為0.01μg/ml

3、、0.1μg/ml、1μg/ml、10μgml、100μg/ml5個濃度梯度，同時設(shè)置空白孔(未接種細胞)和對照組(未接種毒素)，結(jié)果表明無論是蓖麻毒素標準品還是自制蓖麻毒素.隨著攻毒濃度的提高，細胞存活率都呈現(xiàn)下降趨勢；攻毒濃度從1μg/ml提高10ug/ml，無論是標準品還是自制毒素，細胞存活率都在該濃度范圍內(nèi)下降最大，并且自制蓖麻毒素的降幅比蓖麻毒素標準品的降幅略大。
　　 用濃度為1μg/ml的毒素對293a細胞攻毒，同