對蝦白斑綜合癥病毒極早期基因的研究.pdf

1、對蝦白斑綜合癥病毒(WSSV)是困擾對蝦養(yǎng)殖業(yè)最主要的病原體，目前人們對它的侵染機(jī)制還缺乏了解。本研究在建立WSSV體外感染模型的基礎(chǔ)上，應(yīng)用蛋白質(zhì)合成抑制劑來阻斷病毒早期、后期基因的轉(zhuǎn)錄，然后通過基因芯片的方法篩選病毒的極早期基因，共獲得了27個在極早期樣品中特異表達(dá)的陽性探針，其中包括了24個候選的極早期基因(>100aa)。通過RT-PCR方法以及轉(zhuǎn)錄時相分析對這些候選基因進(jìn)行驗證，最終鑒定了16個WSSV的極早期基因(包括一個已

2、知的極早期基因/e/)，其中12個基因在WSSV基因組中呈基因簇分布。進(jìn)一步分析表明WSSV的極早期基因編碼了至少3類調(diào)控因子：包括4個具有轉(zhuǎn)錄激活能力的核蛋白WSV051，WSV069，WSV079，WSV100;1個細(xì)胞核內(nèi)的蛋白激酶WSV083，以及1個定位于核膜與中心體上的泛素連接酶E3，WSV249。這些極早期蛋白可能通轉(zhuǎn)錄調(diào)控，翻譯后修飾等方式對病毒的復(fù)制以及宿主細(xì)胞進(jìn)行精密的調(diào)控，對它們的進(jìn)一步研究將有助于揭示W(wǎng)SSV的感

3、染機(jī)制，建立有效的防治方法。 此外，由于DNA病毒極早期基因啟動子是基因工程中強(qiáng)啟動子的良好來源，本研究還對WSSV極早期基因的啟動子區(qū)進(jìn)行了克隆分析，并檢驗了它們啟動基因轉(zhuǎn)錄的能力。結(jié)果表明wsv051，wsv069，wsv083，wsv108，wsv249的啟動子在在昆蟲細(xì)胞表現(xiàn)出很強(qiáng)的活性；而wsv249的啟動子還可以在螯蝦原代細(xì)胞中啟動基因表達(dá)。因此這些啟動子在構(gòu)建基因工程表達(dá)載體，特別是適用于蝦類的表達(dá)載體上有一定的應(yīng)