流式細胞儀在豬鏈球菌黏附細胞研究中的應用.pdf

1、流式細胞儀（FCM）是一種在功能水平上對單個細胞或其他生物粒子進行定量分析或分選的檢測儀器。它能高速分析上萬個細胞，并能同時測量細胞的物理或化學性質(zhì)。豬鏈球菌（Streptococcus suis）是一種重要的人畜共患病原菌。其中豬鏈球菌2型（SS2）是最常見也是毒力最強的血清型。豬鏈球菌2型不僅可引起豬腦膜炎、關(guān)節(jié)炎、心內(nèi)膜炎、敗血癥、肺炎和突然死亡，還可感染相關(guān)人員并致死。
　　 本研究以革蘭氏陽性菌豬鏈球菌2型（SS2）為

2、研究模型，采用CFDA-SE細胞增殖與示蹤檢測試劑盒標記SS2，將帶有CFDA-SE綠色熒光的SS2分別與Hep-2細胞和RAW巨噬細胞作用，利用流式細胞儀檢測分析，比較豬鏈球菌2型野生株與突變株的差異，以期找出能與豬鏈球菌2型黏附相關(guān)的基因。同時用常規(guī)平板計數(shù)方法檢測SS2黏附Hep-2細胞和RAW巨噬細胞，將統(tǒng)計結(jié)果與流式細胞儀檢測結(jié)果進行比較。
　　 結(jié)果表明CFDA-SE能較好的標記SS2，標記所需時間短，并且菌體內(nèi)熒光

3、穩(wěn)定。流式細胞儀檢測結(jié)果與平板計數(shù)法結(jié)果呈顯著相關(guān)。但流式細胞儀檢測方法操作簡單，費用低，結(jié)果精確，重復性好等。本實驗分別比較了野生型SC19和突變株SSP、2706、11-12、196B對細胞的黏附能力。結(jié)果表明SS2野生型SC19對Hep-2細胞黏附能力較強，對RAW細胞黏附能力一般；突變株SSP缺失的表面蛋白與黏附能力關(guān)系不明顯；2706和196B所缺失的表面蛋白與黏附能力關(guān)系較密切。突變株11-12是缺失限制于修復系統(tǒng)中限制基因