草魚肌肉生長抑制素(MSTN)的cDNA克隆及地塞米松對其表達的影響.pdf

1、肌肉生長抑制素(myostatin，MSTN)是轉化生長因子—β(transforming growth factor—β，TGF—β)超家族的一員，但又與TGF—β超家族其它成員的同源性很低，故又稱為GDF-8(growthdifferentiation factor-8)，研究證實其功能是抑制肌肉細胞的增殖和分化，在哺乳動物主要分布于肌肉組織，而在魚類可以分布于各種組織(如肌肉、眼睛、鰓、腦、脾臟、卵巢、肝臟、小腸等)。魚類與哺乳動

2、物的不同分布、表達方式暗示魚類MSTN除了抑制肌肉生長外，可能還影響其它組織如神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育。 本研究以草魚骨骼肌總RNA為模板，反轉錄合成cDNA，根據(jù)已知鯉科魚類MSTN cDNA序列，設計3對引物，運用了RT—PCR技術克隆草魚肌肉生長抑制素(MSTN)基因cDNA的全長序列，并對其核苷酸序列及推導的氨基酸序列以及預測的蛋白質高級結構進行了分析。同時，本實驗還檢測了注射不同濃度的地塞米松(0μg/kg·d，60μg/kg·

3、d，600μg/kg·d，1200μg/kg·d)以及注射一定濃度(600μg/kg·d)后第1d、第5d、第10d肌肉組織中MSTN表達水平的變化。研究結果表明： 1．克隆草魚MSTN cDNA長度1764nt，編碼區(qū)為1178nt，編碼的氨基酸多肽鏈全長375個氨基酸，符合預期結果。同源性分析顯示，鯉科魚類MSTN編碼區(qū)的氨基酸序列具有較高的同源性，其中草魚MSTN與黑頭軟口鰷MSTN之間的同源性最高，氨基酸序列同源性為97

4、.9％;與其他魚類MSTN的氨基酸序列同源性為78.1％～94.4％。而與鳥類、哺乳類之間的序列同源性相比則相對較低。系統(tǒng)進化分析顯示，不同物種間的MSTN序列同源性基本反映了它們的親緣關系。分析草魚MSTN蛋白一級結構、二級結構、結構域、三級結構可以看出其蛋白質空間結構以一級結構為基礎。 2．地塞米松正向調控草魚MSTN基因表達。注射不同濃度的地塞米松(0μg/kg·d，60μg/kg·d，600μg/kg·d，1200μg/

5、kg·d)，第5d檢測草魚肌肉組織MSTN表達的變化。結果：0μg/kg·d組，60μg/kg·d組，600μg/kg·d組，1200μg/kg·d組相同體積下目的條帶與β—actin吸光度的相對比值平均值分別為0.247605，0.247723，0.330207，0.477166。0μg/kg·d組與60μg/kg·d無顯著差異(P＞0.05)，60μg/kg·d組與600μg/kg·d組有顯著差異(P＜0.05)，600μg/kg·