來(lái)源于柑橘和葡萄的類(lèi)病毒的檢測(cè)與序列分析.pdf

1、類(lèi)病毒是危害植物的一類(lèi)重要病原物。在柑橘上，柑橘裂皮類(lèi)病毒（Citrusexocortisviroid,CEVd）和柑橘類(lèi)病毒Ⅱ(CitrusviroidⅡ，CVd-Ⅱ，又名啤酒花矮化類(lèi)病毒Hopstuntviroid,HSVd)可導(dǎo)致柑橘樹(shù)體矮化、樹(shù)勢(shì)減弱和產(chǎn)量降低，這兩種類(lèi)病毒也可侵染葡萄，但有關(guān)其對(duì)葡萄生長(zhǎng)的影響尚不明確。本研究對(duì)我國(guó)柑橘及葡萄上發(fā)生的類(lèi)病毒進(jìn)行了分子鑒定及分子變異特點(diǎn)的分析，以期為深入了解我國(guó)發(fā)生的果樹(shù)類(lèi)病毒種類(lèi)

2、，明確其分子特性提供有用的信息。本研究主要結(jié)果如下：
　　 1.采用RT-PCR方法對(duì)來(lái)自湖北秭歸縣、武漢市和江西贛州市等地的24份柑橘樣品進(jìn)行了CEVd、CVd-Ⅰ(CBLVd)、CVd-Ⅰ-LSS、CVd-Ⅱ(HSVd)、CVd-Ⅲ、CVd-Ⅳ和CVd-OS共7種類(lèi)病毒的檢測(cè)。檢測(cè)結(jié)果顯示我國(guó)柑橘上至少存在4種柑橘類(lèi)病毒，包括CEVd、CVd-Ⅰ、CVd-Ⅱ和CVd-Ⅲ。其中感染CVd-Ⅱ、CEVd、CVd-Ⅰ和CVd-Ⅲ的

3、樣品分別有9個(gè)、7個(gè)，3個(gè)和5個(gè)，除2個(gè)樣品為CVd-Ⅱ單獨(dú)感染和1個(gè)樣品為CEVd單獨(dú)感染外，其它檢測(cè)到感染類(lèi)病毒的柑橘樣品均為2種或2種以上類(lèi)病毒復(fù)合侵染。
　　 2.對(duì)來(lái)自同一柑橘樣品Hb-C1的CEVd、CVd-Ⅰ、CVd-Ⅱ和CVd-Ⅲ的全長(zhǎng)基因組RNA進(jìn)行了克隆，每種類(lèi)病毒隨機(jī)選取20個(gè)克隆進(jìn)行了測(cè)序和群體結(jié)構(gòu)分析。結(jié)果表明，CEVd、CVd-Ⅰ、CVd-Ⅱ和CVd-Ⅲ均存在一定的分子變異，為多個(gè)分子變種組成的準(zhǔn)種。

4、在同一個(gè)分離物內(nèi)的各分子變種相似性都在90％以上。其中，CVd-Ⅰ的變異程度最小，各分子變種間的相似性為96.3％-100％，優(yōu)勢(shì)分子變種占20％，兩個(gè)亞優(yōu)勢(shì)變種的比例約占10％，非優(yōu)勢(shì)分子變種為60％；CVd-Ⅱ各分子變種間的相似性為95.1％-100％，優(yōu)勢(shì)分子變種占35％，亞優(yōu)勢(shì)變種的比例占15％,非優(yōu)勢(shì)分子變種占50％；CEVd各分子變種間的相似性為92.6％-100％，有一個(gè)優(yōu)勢(shì)分子變種，占15％，兩個(gè)亞優(yōu)勢(shì)變種，比例各約占1

5、0％，非優(yōu)勢(shì)分子變種為65％；CVd-Ⅲ的變異程度較大，各分子變種間的相似性為92.4％-100％，有兩個(gè)主要的優(yōu)勢(shì)分子變種，各占15％。
　　 3.采用RT-PCR方法對(duì)來(lái)自鄭州和湖北的40份葡萄樣品進(jìn)行了CEVd和HSVd的檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果顯示，有2份樣品感染有CEVd，這是中國(guó)首次在葡萄上發(fā)現(xiàn)CEVd；有35％的葡萄樣品感染有HSVd。將獲得的CEVd擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行了克隆，每個(gè)分離物隨機(jī)挑選10個(gè)克隆進(jìn)行測(cè)序和群體結(jié)構(gòu)分析。結(jié)