牙鲆(Paralichthys olivaceus)抗鰻弧菌病和淋巴囊腫病家系及相關(guān)分子標(biāo)記的篩選.pdf

1、牙鲆是中國(guó)、日本和韓國(guó)等國(guó)家的重要海水經(jīng)濟(jì)養(yǎng)殖魚類之一，隨著第四次海水養(yǎng)殖浪潮的到來(lái)，牙鲆養(yǎng)殖業(yè)蓬勃發(fā)展起來(lái)。近些年來(lái)，病害頻發(fā)嚴(yán)重阻礙了牙鲆養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，培育具有抗病力強(qiáng)和養(yǎng)殖存活率高等優(yōu)良性狀的牙鲆新品種是解決這一問(wèn)題的重要途徑之一。從培育抗病新品種的實(shí)際需求出發(fā)，主要對(duì)以下4個(gè)方面進(jìn)行了探討：1、牙鲆抗淋巴囊腫病和高養(yǎng)殖成活率家系的篩選與分析；2、連續(xù)三代牙鲆抗鰻弧菌病家系的篩選與分析；3、牙鲆抗鰻弧菌病和淋巴囊腫病相關(guān)分子標(biāo)記的

2、篩選；4、牙鲆連續(xù)兩代雌核發(fā)育及F1近交家系的遺傳分析。主要研究結(jié)果如下：
　　1、牙鲆抗淋巴囊腫病和高養(yǎng)殖存活率家系的篩選與分析
　　2009年的牙鲆家系在2010年爆發(fā)了淋巴囊腫病，對(duì)16個(gè)家系及對(duì)照組的發(fā)病率進(jìn)行了評(píng)估，得到4個(gè)發(fā)病率低于40％的家系，其中有一個(gè)家系F0939完全沒(méi)有發(fā)?。?011年，在2009年牙鲆家系長(zhǎng)到580日齡時(shí)，統(tǒng)計(jì)了各個(gè)家系的養(yǎng)殖存活率和生長(zhǎng)情況，發(fā)現(xiàn)養(yǎng)殖存活率超過(guò)55%的7個(gè)家系中有6個(gè)家

3、系的至少一個(gè)親本家系F0750，說(shuō)明以F0750做親本可以有效的提高家系的養(yǎng)殖存活率；相關(guān)分析表明，牙鲆淋巴囊腫病的發(fā)病率與感染時(shí)的生長(zhǎng)和580日齡的生長(zhǎng)呈極顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.790)；另外，牙鲆鰻弧菌感染存活率與養(yǎng)殖存活率呈低度正相關(guān)（r=0.371）。
　　2、牙鲆連續(xù)三代抗鰻弧菌病家系的篩選與分析
　　2012年，為了繼續(xù)穩(wěn)定抗病家系的抗病性狀，同時(shí)篩選新的抗鰻弧菌病家系，以實(shí)驗(yàn)室多年建立的牙鲆育種群體和家系為基礎(chǔ)

4、，共建立牙鲆家系65個(gè)，選取其中43個(gè)家系進(jìn)行鰻弧菌感染實(shí)驗(yàn)，共篩選出8個(gè)抗病力強(qiáng)的家系，其中1個(gè)家系極顯著高于對(duì)照組（P<0.01），其他7個(gè)家系顯著高于對(duì)照組（P<0.05），這8個(gè)家系包括4個(gè)F1代家系、2個(gè)F2代價(jià)系、1個(gè)F3家系和1個(gè)雌核發(fā)育二代家系。同時(shí)對(duì)連續(xù)三代16個(gè)抗病力強(qiáng)的家系進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)其中14個(gè)家系與抗病基礎(chǔ)群體有關(guān)，說(shuō)明牙鲆抗鰻弧菌病性能能夠遺傳給后代。
　　3、牙鲆抗鰻弧菌病和抗淋巴囊腫病相關(guān)分子標(biāo)記的

5、篩選
　　(1)牙鲆抗鰻弧菌病QTL的定位
　　為了加快抗鰻弧菌病的選育進(jìn)程，以抗病家系F0750和易感家系F0743的雜交F1代家系F0975為資源家系，采用混合分群分析(BSA)和QTL定位相結(jié)合的方法從高密度遺傳連鎖圖譜上每10cM左右篩選1個(gè)標(biāo)記共178個(gè)標(biāo)記對(duì)感染材料進(jìn)行分析，利用2種模型對(duì)表型性狀進(jìn)行定義，通過(guò)這兩種模型分別定位了1個(gè)（qVT-0）和3個(gè)(qVT-1, qVT-2, qVT-3)QTL位點(diǎn)，這些Q

6、TL區(qū)域的可解釋變異率超過(guò)60%。同時(shí)，qVT-0和 qVT-2定位區(qū)域重合，這個(gè)重合的QTL區(qū)域有可能是牙鲆抗鰻弧菌病的最主要的區(qū)域。
　?。?）牙鲆抗鰻弧菌病家系相關(guān)分子標(biāo)記的篩選
　　由于QTL定位是基于家系的，因此很少具有廣泛的適用性，為了篩選具有較廣泛適用性的抗病相關(guān)標(biāo)記，利用本實(shí)驗(yàn)室從牙鲆的表達(dá)序列標(biāo)簽中篩選到46對(duì)多態(tài)的微衛(wèi)星標(biāo)記（EST-SSR）對(duì)2009年感染的30個(gè)家系進(jìn)行了抗病標(biāo)記篩選，最終得到3個(gè)與抗

7、病顯著相關(guān)（P<0.01）的分子標(biāo)記。
　?。?）牙鲆抗淋巴囊腫病相關(guān)分子標(biāo)記的初步篩選
　　在牙鲆抗淋巴囊腫病相關(guān)分子標(biāo)記篩選方面，本文以一個(gè)發(fā)病率接近50%的家系為材料，首先從高密度連鎖圖譜上篩選178個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記，通過(guò)BSA法進(jìn)行初步篩選，然后用來(lái)自3個(gè)家系的52個(gè)個(gè)體進(jìn)行驗(yàn)證，最后篩選到1個(gè)與抗淋巴囊腫病相關(guān)的分子標(biāo)記。
　　4、牙鲆連續(xù)兩代雌核發(fā)育家系和全同胞近交家系的遺傳分析
　　全同胞近交和雌核發(fā)育

8、是魚類育種中經(jīng)常用來(lái)純合基因和穩(wěn)定性狀的方法，為了準(zhǔn)確評(píng)估這兩種方法的遺傳純合效果，本研究利用來(lái)自于高密度遺傳連鎖圖譜上的30個(gè)微衛(wèi)星對(duì)牙鲆全同胞近交F1代家系、雌核發(fā)育一代、二代家系及其親本家系進(jìn)行了分析，發(fā)現(xiàn)牙鲆減數(shù)分裂雌核發(fā)育可以快速降低后代的遺傳多態(tài)性，提高后代個(gè)體間的遺傳相似度，但由于一些位點(diǎn)的重組率很高，很難通過(guò)簡(jiǎn)單的多次減數(shù)分裂雌核發(fā)育來(lái)得到牙鲆純系，而全同胞近交方式不受重組率高低的影響，可以將兩者結(jié)合起來(lái)培育純系；同時(shí)發(fā)