免疫組化操作步驟

1、免疫組化操作步驟（SP法）：(1)石蠟切片脫蠟和水化：脫蠟之前將切片置于60℃恒溫箱中烘烤30min。a：二甲苯Ⅰ，5min；b：二甲苯Ⅱ，5min；c：二甲苯Ⅲ，5min；d：無水乙醇，5min；e：90%酒精，5min；f：80%酒精，5min；g：70%酒精，5min；(2)新鮮配制0.5%過氧化氫甲醇液，靜置10min，以消除內源性過氧化物酶的活性(3)自來水沖洗3遍，35min(4)抗原修復：將載玻片侵入已加入新鮮配制的001

2、MEDTA，（pH9.0）(或001M枸櫞酸鹽緩沖液pH6.0)的修復容器槽中，置于高壓鍋高火加熱，高壓噴氣后調至低火3min，室溫冷卻30min(5)PBS緩沖液沖洗3遍，35min(6)甩去PBS，放于濕盒中，滴加一抗(7)將濕盒放在4℃冰箱過夜(8)置于37℃恒溫箱復溫30min(9)PBS緩沖液沖洗3遍，35min(10)甩去PBS，滴加二抗(11)置于37℃恒溫箱復溫30min(12)PBS緩沖液沖洗3遍，35min(13)甩

3、去PBS，滴加三抗(14)置于37℃恒溫箱復溫30min(15)PBS緩沖液沖洗3遍，35min(16)甩去PBS，滴加新鮮配制的DAB顯色劑顯色，顯微鏡下控制著色，PBS緩沖液沖洗，流水洗滌(17)蘇木素復染3min，0.1%鹽酸酒精酸化數(shù)秒，沖洗返藍(18)脫水、透明、封片：a：70%酒精，5min；b：80%酒精，5min；c：90%酒精，5min；d：無水乙醇，5min；e：無水乙醇，5min；f：二甲苯Ⅰ，5min；g：二甲苯