級四次分生作業(yè)藍色考題

1、1《分子生物學》作業(yè)一第24章第8章1.什么是什么是SNP？試述研究？試述研究SNP的意義。的意義。全稱SingleNucleotidePolymphisms，是指在基因組DNA上單個堿基的變異引起的DNA序列多態(tài)性。是人類可遺傳變異中最常見的一種.。SNP自身的特性決定了它更適合于對復雜性狀與疾病的遺傳解剖以及基于群體的基因識別等方面的研究：1）、SNP數(shù)量多，分布廣泛。2）、SNP適于快速、規(guī)模化篩查。3）、SNP等位基因頻率的容易

2、估計。4）、易于基因分型。SNPs的二態(tài)性，也有利于對其進行基因分型。對SNP的深入研究具有以下幾方面意義：的深入研究具有以下幾方面意義：（1）由于SNP的低突變率、高密度、易于檢測的特性，使得它在遺傳學分析中得到廣泛應用；（2）SNP具有已知性、可遺傳性、可檢測性，研究SNP可用于疾病基因的定位、克隆和鑒定。尋找疾病相關的突變位點，發(fā)展疾病預防策略，（3）研究SNP本身對機體的影響，尤其是疾病的易感性，從而個性化醫(yī)療。通過對藥物靶點個

3、體差異性分析，個性化藥物、方法治療。（4）法醫(yī)學研究。法醫(yī)檢驗中可以用DNA芯片分析SNP位點，應用于親權鑒定等；(5)器官移植中供體受體配對分析。對SNP的研究將有助于解釋個體的表型差異、不同群體和個體對疾病特別是對負責疾病如腫瘤、某些遺傳疾病、糖尿病、自身免疫性疾病等的易感性和疾病的關聯(lián)基因，此外還在法醫(yī)學和致病基因的搜尋中發(fā)揮重大作用。2.F開放閱讀框架(openreadingframe，F(xiàn))：在DNA鏈上，由蛋白質(zhì)合成的起始密碼

4、開始，到終止密碼為止的一個連續(xù)編碼序列。3.調(diào)節(jié)基因調(diào)節(jié)基因指一段有效地DNA片段，他通過轉錄、翻譯而產(chǎn)生調(diào)節(jié)蛋白，該蛋白與操縱基因相互作用，從而對操縱子的活動進行控制。4.請介紹目前蛋白質(zhì)組學研究中最常用的基本技術流程并簡述其原理。請介紹目前蛋白質(zhì)組學研究中最常用的基本技術流程并簡述其原理。蛋白質(zhì)組學常用的研究方法有雙向凝膠電泳和質(zhì)譜技術，基于凝膠的工作流程是目前使用的較為廣泛的、發(fā)展最為成熟的工作流程。（1）樣品制備—樣品來源于細胞

5、、組織、體液等。也可采用全蛋白或進行預分級（線粒體、高爾基體、葉綠體、膜蛋白、核蛋白等）以提高低豐度蛋白質(zhì)的上樣量及檢測靈敏度。應注意盡可能擴大蛋白質(zhì)的溶解度和解聚，以提高分辨率。（2）樣品分離—雙向凝膠電泳（twodimensionalelectrophesis，2DE）：利用蛋白質(zhì)的等電點與分子量差異分離之。第一向：等電聚焦IEF第二向：SDSPAGE。（3）染色方法考馬斯亮藍染色、銀染（不含戊二醛）、熒光染色（Cy3、Cy5），放

6、射性同位素標記等。5.簡述酵母雙雜交技術的原理。簡述酵母雙雜交技術的原理。答：答：很多真核生物的位點特異轉錄激活因子通常具有兩個可分割開的結構域，即DNA特異結合域（BD）與轉錄激活域（AD）。這兩個結構域各具功能，互不影響。但一個完整的激活特定基因表達的激活因子必須同時含有這兩個結構域否則無法完成激活功能。不同來源激活因子的BD區(qū)與AD結合后則特異地激活被BD結合的基因表達?；谶@個原理，可將兩個待測蛋白分別與這兩個結構域建成融合蛋白

7、，并共表達于同一個酵母細胞內(nèi)。如果兩個待測蛋白間能發(fā)生相互作用，就會通過待測蛋白的橋梁作用使AD與BD形成一個完整的轉錄激活因子并激活相應的報告基因表達。通過對報告基因表型的測定可以很容易地知道待測蛋白分子間是否發(fā)生了相互作用。3交情況等。8.舉例說明載體應具備的基本要素以及雙抗生素篩選和藍白斑篩選的原理。舉例說明載體應具備的基本要素以及雙抗生素篩選和藍白斑篩選的原理。(1)載體應具有以下特征載體應具有以下特征①能自我復制并具有較高的拷

8、貝數(shù)，并有適宜的相對分子量，一般應10kb②帶有遺傳篩選標記；③有適當?shù)南拗泼盖形稽c，便于外源基因的插入和篩選。（2）雙抗生素篩選原理雙抗生素篩選原理：某些質(zhì)粒載體如pBR322質(zhì)粒中裝有Ampr和Tetr抗性基因，在含四環(huán)素和氨芐青霉素的平皿上都能夠生長的細菌只含有空載體，此篩選方法稱為雙抗生素對照篩選。(3)Bluewhite(3)Bluewhitescreen:screen:藍白斑篩選。藍白斑篩選。即β半乳糖苷酶基因失活篩選。其原

9、理是：某些質(zhì)粒載體帶有大腸桿菌乳糖操縱子的lacZ’基因，該基因含一段編碼β半乳糖苷酶氨基末端145個氨基酸α－肽的DNA片斷，IPTG可誘導此片斷合成，此片斷能與宿主細胞所編碼的缺陷型β半乳糖苷酶實現(xiàn)基因內(nèi)α－互補，形成完整的β－半乳糖苷酶。該酶能催化指使劑底物X－gal形成藍色菌落。當外源基因插入lacZ’基因中MCS(多克隆位點)，lacα－肽基因閱讀框架被破壞，細菌內(nèi)將無β－半乳糖苷酶活性，結果重組克隆呈白色菌落。9.有哪些常用

10、的探針標記物？有哪些常用的探針標記物？如何進行探針的標記？如何進行探針的標記？放射性同位素標記放射性同位素標記:常用標記探針的同位素用標記探針的同位素:32P：β，半衰期短（，半衰期短（14.3d），標記核苷三磷酸，靈敏度很高，分辨率不高。，標記核苷三磷酸，靈敏度很高，分辨率不高。35S：β，標記蛋氨酸或取代核苷酸，標記蛋氨酸或取代核苷酸α位磷酸基中的氧，靈敏度高，分辨率較位磷酸基中的氧，靈敏度高，分辨率較高，核酸序列測定和原位雜交。高

11、，核酸序列測定和原位雜交。3H：β，半衰期長（，半衰期長（4417d），使用較少。，使用較少。125I：γ，分辨率高，操作簡單，安全防護要求較高，原位雜交。，分辨率高，操作簡單，安全防護要求較高，原位雜交。同位素標記方法同位素標記方法1.缺口平移法（雙鏈）缺口平移法（雙鏈）2隨機引物法隨機引物法（單鏈）（單鏈）3.DNA探針的末端標記探針的末端標記4PCR標記標記DNA探針探針5單向體外轉錄制備單向體外轉錄制備RNA探針探針非放射性標記

12、非放射性標記1）.酶標記核酸探針酶標記核酸探針辣根過氧化物酶（HRP）易進入細胞內(nèi)部，便宜，易觀察，應用最廣泛。常用標記方法是戊二醛交聯(lián)法和過碘酸鈉法2）生物素（生物素（biotin）標記核酸探針）標記核酸探針應用廣泛，可替代同位素標記。用鏈親和素系統(tǒng)檢測。酶促標記法操作復雜，價格昂貴。光敏生物素（photobiotin）標記方法簡單，價格適宜。地高辛（地高辛（DIG）：）：標記于dUTP上，通過隨機引物或缺口平移法引入DNA分子中?？?/p>

13、長期保存，不受組織、細胞中內(nèi)源性生物素的干擾，敏感性高，檢測產(chǎn)物反差好，背景染色低。廣泛應用于Southern印跡雜交、斑點雜交、菌落雜交尤其是原位雜交。熒光素（熒光素（fluescein）：）：標記方法有直接法和間接法。非放射性標記方法非放射性標記方法1.化學修飾法：簡單、成本低、較通用。化學修飾法：簡單、成本低、較通用。2.酶促反應標記法：靈敏度高，過程較復雜，成本較高。酶促反應標記法：靈敏度高，過程較復雜，成本較高。10.影響核酸

14、分子雜交的因素有那些？如何進行雜交條件的優(yōu)化？影響核酸分子雜交的因素有那些？如何進行雜交條件的優(yōu)化？影響核酸分子雜交的因素：影響核酸分子雜交的因素：（1）溫度和時間：一般認為比Tm低25℃左右的溫度是復性的最佳條件，越遠離此溫度，復性速度就越慢；復性時溫度下降必須是一緩慢過程，若在超過Tm的溫度下迅速冷卻至低溫（如4℃以下），復性幾乎是不可能的。（2）DNA濃度：DNA復性的第一步是兩個單鏈分子間的相互作用“成核”，“成核”速度與DNA