血管緊張素ⅱ對心肌細胞k,v4.2鉀通道蛋白表達的影響及其機制研究

1、岫．2 0 0 3 3 1 8 3學校代碼 1 1 9 1 9l 中圖分類號血管緊張素I I 對心肌細胞K v 4 ．2 鉀通道蛋白表達的影響及其機制研究研 究 生導 師專 業(yè)二 級 學 院研究起止日期提 交 日 期李亮許彥芳教授藥理學基礎醫(yī)學院2 0 0 4 年9 月—2 0 0 6 年3 月2 0 0 6 年3 月中文摘要1 新生大鼠心肌細胞的原代培養(yǎng)及鑒定目的：建立改良的大鼠乳鼠心肌細胞原代培養(yǎng)技術。方法：取新生7 2 小時內的S

2、 D 仔鼠，消毒，開胸，夾取心室部分，于D —H a n k ’S 液中洗滌，剪碎。消化3 - 4 次后，離心，收集細胞，用培養(yǎng)液混懸，過濾，差速貼壁1 小時后，收集培養(yǎng)液中的非貼壁細胞，細胞計數(shù)，細胞密度調至5 ×1 0 5 個／m l ，種于鋪有圓蓋玻片的2 4 孔板中，1 天后換培養(yǎng)基，然后每隔2 天更換培養(yǎng)基1 次。臺盼藍法測定細胞存活率。倒置相差顯微鏡下動態(tài)觀察心肌細胞形態(tài)學變化后于共聚焦顯微鏡下照像。免疫細胞化學技

3、術鑒定心肌細胞。’結果：( 1 ) 細胞存活率測定臺盼藍染色觀察僅5 ％細胞著色，細胞存活率達9 5 ％以上。( 2 ) 心肌細胞形態(tài)學觀察2 4h 后觀察細胞已全部貼壁，貼壁后為梭形，菱形或多角形，9 0 ％開始搏動。繼而細胞逐漸在皿底表面鋪展，并伸出偽足，形成不規(guī)則的星形并相互接觸交織成網(wǎng)，在培養(yǎng)第4 8 h 可形成呈放射狀排列的細胞簇，其搏動已同步化，每分鐘1 2 0次左右。培養(yǎng)1 0 天仍可見到成團搏動的心肌細胞。( 3 ) 心