生物大分子與光譜探針相互作用動(dòng)力學(xué)研究及分析應(yīng)用.pdf

1、本文利用分光光度法研究了生物大分子與光譜探針偶氮氯膦Ⅲ、結(jié)晶紫和二甲酚橙的相互作用及其動(dòng)力學(xué)反應(yīng)機(jī)理，并建立了動(dòng)力學(xué)法測(cè)定生物大分子的新體系。研究了反應(yīng)條件、共存離子干擾、動(dòng)力學(xué)參數(shù)等。并借助熒光光度法、紅外光譜法等光譜分析證明了該反應(yīng)機(jī)理。具體內(nèi)容如下： 第1章綜述了近年來(lái)蛋白質(zhì)分析研究的方法和成果。 第2章在0.01 mol/L硫酸介質(zhì)及沸水浴條件下，研究了蛋白質(zhì)阻抑KIO<,4>氧化偶氮氯瞵Ⅲ褪色的反應(yīng)，通過(guò)測(cè)量催

2、化和阻抑體系中偶氮氯膦Ⅲ在550 nm處的吸光度，計(jì)算ΔA，建立了測(cè)定痕量蛋白質(zhì)的新方法，蛋白質(zhì)的濃度在0～6 mg/L范圍與催化反應(yīng)速度呈良好的線性關(guān)系，方法的檢出限為2.9×10<'-13>mg/L。對(duì)實(shí)際樣品進(jìn)行了測(cè)定，回收率為96～109％。研究了動(dòng)力學(xué)反應(yīng)機(jī)理，確定為假一級(jí)動(dòng)力學(xué)行為，活化能增加了67.77 KJ/mol。 第3章利用動(dòng)力學(xué)法研究了堿性條件下結(jié)晶紫與蛋白質(zhì)之間的相互作用。實(shí)時(shí)測(cè)量了反應(yīng)的進(jìn)程，確定了蛋白

3、質(zhì)與結(jié)晶紫的結(jié)合位點(diǎn)數(shù)(n)，反應(yīng)動(dòng)力學(xué)參數(shù)(AE)，研究了蛋白質(zhì)存在的下結(jié)晶紫醇化反應(yīng)的機(jī)理。確定蛋白質(zhì)與結(jié)晶紫存在兩種作用位點(diǎn)，蛋白質(zhì)對(duì)結(jié)晶紫的醇化反應(yīng)在不同時(shí)期分別起催化和阻抑的作用。并提出了測(cè)定蛋白質(zhì)的動(dòng)力學(xué)吸光光度法。人血清蛋白質(zhì)濃度在0.005～11 mg/L，牛血清白蛋白濃度在0.005～8 mg/L范圍內(nèi)與ΔA呈線性關(guān)系，檢出限均為2.1×10<'-13>mg/L。 第4章在酸性溶液中，研究了過(guò)氧化氫氧化結(jié)晶紫(

4、CV)褪色，DNA對(duì)該氧化褪色反應(yīng)起阻抑作用(反催化作用)，采用流水冷卻的辦法終止反應(yīng)，據(jù)此建立了一種測(cè)定微量DNA的動(dòng)力學(xué)分析新方法。DNA的含量在0～1.0 mg/L范圍內(nèi)與抑制褪色的程度呈線性關(guān)系，檢測(cè)限為0.004 mg/L。優(yōu)化了實(shí)驗(yàn)的條件，初步提出了動(dòng)力學(xué)反應(yīng)測(cè)定微量DNA的機(jī)理。 第5章本章研究了在稀硫酸介質(zhì)中，蛋白質(zhì)靈敏地阻抑溴酸鉀氧化二甲酚橙的褪色反應(yīng)。研究了反應(yīng)條件，及阻抑反應(yīng)的機(jī)理，建立了動(dòng)力學(xué)光度法測(cè)定痕